[發(fā)明專利]采用反相高效液相色譜法分離手性對映體的方法及羥丙基?β?環(huán)糊精的應(yīng)用

在審

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• 申請日: 2017-04-20
• 公開（公告）號: CN106996964A
• 公開（公告）日: 2017-08-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬崇琳;劉芳;趙作正
• 申請（專利權(quán)）人: 山東賽托生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京潤澤恒知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司11319
• 代理人: 蘇培華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于手性對映體的分離技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種采用反相高效液相色譜法分離手性對映體的方法，以及一種羥丙基-β-環(huán)糊精的應(yīng)用。

背景技術(shù)

手性分子又稱手性對映體，是化學(xué)中結(jié)構(gòu)上鏡像對稱而又不能完全重合的分子，具有兩種分子結(jié)構(gòu)。具有不同分子結(jié)構(gòu)的兩種手性分子除旋光性存在差異外，物理性質(zhì)相同，化學(xué)性質(zhì)可能相似，因此使用常規(guī)的高效液相色譜法無法實現(xiàn)兩種手性分子的分離。但是由于具有不同分子結(jié)構(gòu)的兩種手性分子在生物活性及藥理作用等方面往往存在較大差別，甚至作用相反，因此有必要對手性分子進(jìn)行分離，分別考察其相關(guān)活性并加以合理使用。

β-環(huán)糊精是由7個吡喃型葡萄糖組成的低聚糖，具有上寬下窄、兩端開口的中空筒狀結(jié)構(gòu)，其空腔內(nèi)部相對疏水，外部由極性羥基包圍而相對親水，這種特殊結(jié)構(gòu)使得β-環(huán)糊精具有極性和非極性的獨(dú)特性質(zhì)。基于β-環(huán)糊精分子內(nèi)具有多個手性中心、其絡(luò)合作用具有高度立體選擇性且價格便宜，因此現(xiàn)有技術(shù)使用β環(huán)糊精作為流動相添加劑，采用高效液相色譜法對手性分子進(jìn)行拆分。

但是，由于β-環(huán)糊精在水中溶解度小，將其用作流動相添加劑易造成色譜柱堵塞，因此β-環(huán)糊精的上述性質(zhì)很大程度上限制了其在采用高效液相色譜法分離手性分子中的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種采用反相高效液相色譜法分離手性對映體的方法，以全部或部分解決上述技術(shù)問題。

為了解決上述問題，本發(fā)明公開了一種采用反相高效液相色譜法分離手性對映體的方法，包括：

將羥丙基-β-環(huán)糊精作為添加劑添加至原始流動相中，得到所需的反相色譜流動相；

使用所述反相色譜流動相和反相色譜固定相，對手性對映體16α-甲基雄甾-4,9(11)-二烯-3,17-二酮和16β-甲基雄甾-4,9(11)-二烯-3,17-二酮進(jìn)行反相高效液相色譜分離。

可選地，所述將羥丙基-β-環(huán)糊精

作為添加劑添加至原始流動相中包括：

將羥丙基-β-環(huán)糊精水溶液添加至所述原始流動相中。

可選地，所述原始流動相與所述羥丙基-β-環(huán)糊精水溶液的體積比為40:60～30:70；

所述羥丙基-β-環(huán)糊精水溶液的濃度為0.02～0.04g/ml。

可選地，在對所述16α-甲基雄甾-4,9(11)-二烯-3,17-二酮和所述16β-甲基雄甾-4,9(11)-二烯-3,17-二酮進(jìn)行反相高效液相色譜分離時，所述反相色譜流動相的流速為1～1.2ml/min。

可選地，所述原始流動相為乙腈或甲醇。

可選地，所述反相色譜固定相為Eclipse Plus-C8色譜柱或ZORBAX SB-C18色譜柱。

可選地，所述Eclipse Plus-C8色譜柱或所述ZORBAX SB-C18色譜柱的柱溫為35～40℃。

可選地，所述Eclipse Plus-C8色譜柱或所述ZORBAX SB-C18色譜柱的尺寸為250mm×4.6mm。

本發(fā)明實施例還提供了一種羥丙基-β-環(huán)糊精的應(yīng)用，采用反相高效液相色譜法分離手性對映體16α-甲基雄甾-4,9(11)-二烯-3,17-二酮和16β-甲基雄甾-4,9(11)-二烯-3,17-二酮時，將羥丙基-β-環(huán)糊精作為添加劑添加至原始流動相中，所述羥丙基-β-環(huán)糊精和所述原始流動相組合成反相色譜流動相。

可選地，所述原始流動相為乙腈或甲醇。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明包括以下優(yōu)點(diǎn)：

本發(fā)明提供了一種采用反相高效液相色譜法分離手性對映體的方法，選擇羥丙基-β-環(huán)糊精作為流動相添加劑，由于羥丙基-β-環(huán)糊精在水中溶解度較大，因此將其作為流動相添加劑不會造成色譜柱堵塞，可以有效避免傳統(tǒng)β-環(huán)糊精易造成色譜柱堵塞的缺陷。

依據(jù)本發(fā)明實施例所述方法對手性對映體進(jìn)行分離時，使用常規(guī)色譜柱即可實現(xiàn)手性對映體的高效分離，操作簡單。與傳統(tǒng)的手性固定相高效液相色譜法相比，本發(fā)明實施例所述方法成本低廉，更加經(jīng)濟(jì)適用，具有廣泛的應(yīng)用前景。

附圖說明

圖1是本發(fā)明實施例所述的一種采用反相高效液相色譜法分離手性對映體的方法的流程圖；

圖2是本發(fā)明實施例的16α(β)-甲基雄甾-4,9(11)-二烯-3,17-二酮手性對映體在不同手性流動相添加劑條件下的高效液相色譜圖；