[發(fā)明專利]重組人干擾素α2a栓及制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710260411.8
• 申請(qǐng)日: 2017-04-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106983716A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-07-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉景會(huì);劉琳琳;李利;王宇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 長(zhǎng)春生物制品研究所有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): A61K9/02
• 分類號(hào): A61K9/02;A61K38/21;A61P15/00;A61P15/02;A61P31/22;A61P31/20
• 代理公司: 吉林長(zhǎng)春新紀(jì)元專利代理有限責(zé)任公司22100
• 代理人: 陳宏偉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明一種重組人干擾素α2a栓，同時(shí)提供了及其制備方法，屬于生物制藥技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

干擾素是（interferon，IFN）是由細(xì)胞基因控制，在特定誘導(dǎo)劑作用下產(chǎn)生的一類高活性、多功能蛋白質(zhì)，具有廣譜抗病毒、抗細(xì)胞分裂、抗腫瘤和細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)等多種生物活性。干擾素抗病毒機(jī)理是主要作用于細(xì)胞膜上的受體系統(tǒng)，細(xì)胞內(nèi)抗病毒蛋白基因去抑制而被激活，合成抗病毒蛋白mRNA，轉(zhuǎn)移到胞漿核糖體，再轉(zhuǎn)譯成幾種抗病毒蛋白，從而阻斷病毒的繁殖。干擾素是當(dāng)前國(guó)內(nèi)外臨床應(yīng)用于有效治療乙型肝炎、丙型肝炎、尖銳濕疣、慢性宮頸炎、宮頸糜爛、毛細(xì)胞性白血病等30多種病毒疾病的生物制劑。我國(guó)自從1990年批準(zhǔn)衛(wèi)生部長(zhǎng)春生物制品研究所干擾素α1b滴眼劑治療單皰性角膜炎以來(lái)，已相繼批準(zhǔn)治療乙型肝炎、丙型肝炎、慢性宮頸炎、尖銳濕疣、單純皰疹等10多種疾病，取得了理想的臨床療效。自60年代起，干擾素劑型已由滴眼劑發(fā)展為注射劑，軟膏劑，栓劑等多種劑型，這些劑型可根據(jù)不同疾病進(jìn)行選擇并在臨床應(yīng)用中都獲得了好的治療效果。

重組人干擾素α2a，是一類由白細(xì)胞及淋巴細(xì)胞所產(chǎn)生的多功能和高活性的誘生蛋白，遇光和濕不穩(wěn)定。重組人干擾素α2a具有廣譜抗病毒作用和對(duì)機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)功能，其抗病毒機(jī)制主要通過(guò)干擾素同靶細(xì)胞表面干擾素受體結(jié)合，誘導(dǎo)靶細(xì)胞內(nèi)2-5（A）合成酶、蛋白激酶PKR、MX蛋白等多種抗病毒蛋白，阻止病毒蛋白質(zhì)的合成、抑制病毒核酸的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄而實(shí)現(xiàn)。重組人干擾素α2a的劑型開(kāi)發(fā)一直很不理想，影響了重組人干擾素α2a的應(yīng)用。

目前臨床使用的重組人干擾素α2a有注射劑、軟膏劑、片劑和栓劑等。臨床證明干擾素濃度越高，其治療病毒的效果就越好。但有些劑型的重組人干擾素α2a，由于全身給藥或者局部給藥濃度過(guò)高帶來(lái)了各種副作用反應(yīng)，治療效果受到很大的影響。常用的重組人干擾素α2a注射劑存在使用不便和有輕微疼痛的問(wèn)題，且不能直接作用于病灶，到達(dá)用藥部位的濃度有限，且存在一定的不良反應(yīng)。重組人干擾素α2a軟膏劑雖然在治療顏面和生殖器皰疹有很好的療效，但同時(shí)也存在局限性。重組人干擾素α2a片劑塞入陰道后，重組人干擾素α2a難以溶出，難于發(fā)揮作用，且片劑對(duì)人體陰道的適應(yīng)性不好。重組人干擾素α2a栓劑在臨床上主要用于因病毒感染所引起的婦女慢性宮頸炎、宮頸糜爛和陰道炎的治療，其臨床療效主要與重組人干擾素α2a的生物活性有關(guān)。重組人干擾素α2a作為一種蛋白質(zhì)，因受各種因素的影響，其結(jié)構(gòu)往往會(huì)被破壞而失去生物活性，因此在傳統(tǒng)的重組人干擾素α2a栓劑生產(chǎn)過(guò)程中需要加入人血白蛋白作為保護(hù)劑，保持其生物活性，然而以人血白蛋白作為保護(hù)劑存在著來(lái)源困難、價(jià)格昂貴、生產(chǎn)成本增加、有感染血液病毒的風(fēng)險(xiǎn)。目前上市的重組人干擾素α2a栓劑的貯藏條件還必須要在2～8℃下避光保存和運(yùn)輸，不僅增加藥品保存及運(yùn)輸過(guò)程中的能源消耗從而增加成本。同時(shí)，冰箱冷藏下保存使患者用藥的依從性下降，不能更好的保證藥品的療效。因此，研究開(kāi)發(fā)和改進(jìn)重組人干擾素α2a栓的生產(chǎn)工藝，可使栓劑更加穩(wěn)定，用藥更加方便，局部用藥能夠讓低濃度栓劑在陰道能夠保持高水平的藥物濃度，從而有效改善干擾素臨床用藥的一些不良反應(yīng)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種重組人干擾素α2a栓，解決了傳統(tǒng)重組人干擾素α2a栓的價(jià)格高，蛋白質(zhì)不穩(wěn)定，貯藏難，患者注射使用依從性不好等問(wèn)題，是一種將經(jīng)過(guò)發(fā)酵、純化得到的重組人干擾素α2a原液與甘油明膠基質(zhì)混合均勻后制成的重組人干擾素α2a栓。

本發(fā)明進(jìn)一步還提供了重組人干擾素α2a栓的制備方法，藥物的主要有效成分重組人干擾素α2a原液是利用大腸桿菌表達(dá)技術(shù)構(gòu)建含有人干擾素α2a基因的重組質(zhì)粒，并轉(zhuǎn)化至大腸桿菌中獲得穩(wěn)定的工程菌，工程菌發(fā)酵后通過(guò)一系列純化工藝獲得重組人干擾素α2a原液，經(jīng)無(wú)菌過(guò)濾后和用作保護(hù)有效成分生物學(xué)活性的甘油明膠基質(zhì)混合制成重組人干擾素α2a栓。

本發(fā)明公開(kāi)的一種重組人干擾素α2a栓的制備方法，包括以下步驟：

1) 將甘油、明膠、注射用水按照5：2：1～5：3：2比例加入到無(wú)菌密閉的栓劑基質(zhì)罐中，溫度加熱至80～90℃，并不斷攪拌使其溶解，攪拌速度為20～40rpm，攪拌時(shí)間為2～4小時(shí)；

2) 將均勻混合后的栓劑基質(zhì)在111～131℃下滅菌60～70分鐘，從而達(dá)到無(wú)菌狀態(tài)；

3) 將滅菌后的栓劑基質(zhì)冷卻至52～56℃，并保持基質(zhì)溫度在此范圍內(nèi)；