[發明專利]一種生產A82846B的基因工程菌及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201710258568.7
• 申請日: 2017-04-19
• 公開（公告）號: CN108728390B
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: 陳少欣;王偉艷;馬巧慧;沈曉放;楊松柏
• 申請（專利權）人: 上海醫藥工業研究院;中國醫藥工業研究總院
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12P21/02;C12R1/01
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 薛琦;朱水平

1.一種生產A82846B的基因工程菌，其特征在于，其是在生產A82846B的出發菌東方擬無枝酸菌(Amycolatopsis orientalis)的基因組中整合了內源鹵化酶基因chaA，或者外源鹵化酶基因；

其中，所述外源鹵化酶基因是來源于東方擬無枝酸菌(Amycolatopsis orientalis)的vcm8、地中海擬無枝酸菌(Amycolatopsis mediterranei)的bhaA、替考游動放線菌(Actinoplanes teichomyceticus)的thaA或游動放線菌(Actinoplanes sp.)的halI基因。

2.如權利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述的chaA的核苷酸序列如SEQ IDNO:1所示，所述的vcm8的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述的bhaA的核苷酸序列如SEQID NO:3所示，所述的thaA的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示，所述的halI的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。

3.如權利要求1或2所述的基因工程菌，其特征在于，所述生產A82846B的出發菌為東方擬無枝酸菌NRRL18099天然菌株。

4.一種制備如權利要求1-3任一項所述基因工程菌的方法，其特征在于，所述方法包括下列步驟：

1)PCR擴增或人工合成所述的chaA、vcm8、bhaA、thaA或halI；

2)構建包含所述的chaA、vcm8、bhaA、thaA或halI的重組質粒；

3)將構建的重組質粒轉化到中間宿主菌；

4)將帶有重組質粒的中間宿主菌和生產A82846B的出發菌進行接合培養。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述重組質粒的骨架為permE152質粒或pSET152。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，所述的中間宿主菌為大腸桿菌ET12567/pUZ8002。

7.如權利要求4-6任一項所述的方法，其特征在于，所述的接合培養為在MS瓊脂培養基培養，所述培養的溫度為28℃。

8.一種A82846B的制備方法，其特征在于，包括將如權利要求1-3任一項所述的基因工程菌發酵，從發酵液中獲得所述A82846B。