[發明專利]一種A型賽尼卡谷病毒滅活疫苗及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201710254431.4
• 申請日: 2017-04-18
• 公開（公告）號: CN107184969B
• 公開（公告）日: 2020-07-10
• 發明（設計）人: 董金杰;田波;呂宏亮;劉萍;陳苗苗;鄧瑞雪;張濤;王會寶;王凡;劉西蘭;景志忠;高世杰;王超英;張云德;殷宏;張永光
• 申請（專利權）人: 中農威特生物科技股份有限公司
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61K39/39;C12N15/85;C12N15/41;C12N7/00;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

本發明公開了一種A型賽尼卡谷病毒滅活疫苗及其制備方法和應用。所述的A型賽尼卡谷病毒滅活疫苗中含有滅活后的豬A型賽尼卡谷病毒全病毒顆粒抗原以及佐劑，其中所述的豬A型賽尼卡谷病毒全病毒顆粒抗原是由豬A型賽尼卡病毒全長感染性cDNA克隆通過病毒拯救獲得的，所述的感染性cDNA克隆的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本發明將滅活的豬A型賽尼卡谷病毒全病毒顆粒抗原與獸醫藥學上可接受的佐劑相配伍，特別是獸醫學上可接受的多聚賴氨酸羥甲基纖維素聚肌胞配伍，可提高滅活全病毒疫苗的免疫原性和效果，一頭份就可產生完全保護，保護持續期1年。相比亞單位、病毒樣顆粒疫苗，生產成本低，相比減毒活疫苗更加安全。

技術領域

本發明涉及一種A型賽尼卡谷病毒滅活疫苗及其制備方法和應用，還涉及一種豬A型賽尼卡病毒的全長感染性cDNA克隆以及由該全長感染性cDNA克隆拯救得到的豬A型賽尼卡病毒。本發明屬于生物醫藥技術領域。

背景技術

A型賽尼卡谷病毒(Seneca Valley virus A，SVA)是小RNA病毒科賽尼卡谷病毒屬的唯一成員，能夠引起母豬嚴重的水泡病和新生仔豬死亡，可能通過豬尿液傳播。2014和2015年,美國、巴西母豬發生水皰病、仔豬死亡爆發流行，造成巨大經濟損失。

防控賽尼卡谷病毒的關鍵在于制備賽尼卡谷病毒滅活疫苗，傳統賽尼卡谷病毒滅活疫苗的制備方法是通過采用豬A型賽尼卡谷病毒在豬睪丸二倍體細胞或豬腎傳代細胞增殖，進而滅活后制得，但病毒在增殖過程中存在生長慢、滴度低等的問題，且這些細胞有內源性病毒污染，大大限制了大規模工業生產。

對此，本發明提供了一種豬A型賽尼卡谷病毒的全長感染性克隆，克服了豬A型賽尼卡谷病毒在豬睪丸二倍體細胞或豬腎傳代細胞上生長慢、滴度低等的問題,拯救獲得的A型賽尼卡谷病毒在MRC-5、BHK-21細胞的連續傳代，純化了病毒、提高了其生長性，本發明為賽尼卡谷病毒感染的防控提供了有效的技術手段。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種A型賽尼卡谷病毒滅活疫苗及其制備方法和應用。該疫苗能夠使豬產生抗賽尼卡谷病毒感染和賽尼卡谷病毒引起疾病的保護性免疫。

為了達到上述目的，本發明采用了以下技術手段：

本發明的一種A型賽尼卡谷病毒滅活疫苗，其含有滅活后的豬A型賽尼卡谷病毒全病毒顆粒抗原以及佐劑，其中所述的豬A型賽尼卡谷病毒全病毒顆粒抗原是由豬A型賽尼卡病毒全長感染性cDNA克隆通過病毒拯救獲得的，所述的感染性cDNA克隆的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

在本發明中，優選的，所述的佐劑為含有20-50g/L多聚賴氨酸羥甲基纖維素聚肌胞(Poly ICLC)，0.1-0.5g/L的EDTA以及0.01-0.1g/L的吐溫-20的磷酸緩沖液，調節pH值8.0，優選的，所述的佐劑為含有25g/L多聚賴氨酸羥甲基纖維素聚肌胞(Poly ICLC)，0.2g/L的EDTA以及0.05g/L的吐溫-20的50mM磷酸緩沖液，調節pH值8.0。

進一步的，本發明還提出了一種制備所述的A型賽尼卡谷病毒滅活疫苗的方法，包括以下步驟：

1)豬A型賽尼卡病毒全病毒顆粒抗原的制備

(1)豬A型賽尼卡谷病毒的拯救

構建含有豬A型賽尼卡谷病毒的全長感染性cDNA克隆的表達載體，其中所述cDNA克隆具有SED ID NO.1所示的核苷酸序列；優選的，所述的表達載體是通過將SED ID NO.1所示的核苷酸序列克隆入pSVL載體中構建得到的；