[發明專利]一種鑒定中藥守宮的特異性引物、試劑盒及鑒別方法

有效

• 申請號: 201710254140.5
• 申請日: 2017-04-18
• 公開（公告）號: CN106868194B
• 公開（公告）日: 2019-07-26
• 發明（設計）人: 李建生
• 申請（專利權）人: 北京建生藥業有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產權代理有限公司 11250
• 代理人: 李敏

本發明提供了一種鑒定中藥守宮的特異性引物、試劑盒及鑒別方法，基于守宮的CYTB基因設計了大量的引物，且通過大量引物篩選研究，篩選出了具有種屬特異性的引物，使用上述引物對待測中藥守宮進行鑒定，能將守宮藥材與其他混淆品準確的分開，且其PCR擴增產物僅為100～250bp，分子量小，保證了其在短時間內進行大量的中藥守宮鑒定，鑒定結果準確、穩定、可靠、靈敏度高。

技術領域

本發明屬于中藥材鑒定技術領域，具體涉及一種鑒定中藥守宮的特異性引物、試劑盒及鑒別方法。

背景技術

守宮為壁虎科動物無蹼壁虎(Gekko Swinhoana Gunther)的全體，其藥性寒、味咸，有小毒，入肺、腎經。具有散結解毒、滋陰涼血、熄風鎮痙、透經達絡等功效。古代醫學典籍中關于守宮的記載有很多，如《本草綱目》中記載，守宮主治中風癱瘓，手足不舉，或歷節風痛，及風驚癇，小兒疳痢，血積瘰，療蝎螫；清代趙其光在《本草求原》中提到守宮入血分、治血病，有滋陰降痰之功效；《四川中藥志》稱其能“驅風、破血積包塊，治腫瘤”。

由于守宮的來源比較復雜，市售守宮常出現混雜或偽品，如東方蠑螈、中國瘰螈、變色樹蜥、蛤蚧、紅螺疣螈、喜山巖蜥、青海沙蜥、石龍子和變色沙蜥等。對其中的一些品種，守宮正品與之形態學特征差別細微，采用傳統的鑒別方法很難對守宮藥材進行鑒定，鑒于守宮在炮制、加工、儲藏和運輸等各個環節形態有所改變，使得守宮及其混偽品的性狀特征消失，從而加大了鑒別難度。而不法分子在經濟利益的驅使下，守宮“以假充真”、“以次充好”、“不合格產品”的市場現象普遍存在，即使具有豐富鑒別經驗的人員也很難根據形態特征進行準確地鑒別。為確保中藥材的質量及臨床療效，已有研究采用現代分子生物學PCR擴增技術，可在短時間內完成對部分中藥材的鑒別，然而現有技術中還未提出一種利用PCR技術來快速鑒別中藥守宮種的特異性引物以及方法。

發明內容

本發明要解決的第一個技術問題在于提供一種鑒定中藥守宮的特異性引物，采用所述引物鑒定中藥守宮，鑒定結果準確、穩定、可靠、靈敏度高，能夠在短時間內對大量待測中藥守宮進行快速鑒定，效率高。

本發明要解決的第二個技術問題在于提供一種鑒定中藥守宮的試劑盒，采用所述試劑盒鑒定中藥守宮，鑒定結果準確、穩定、可靠、靈敏度高，能夠在短時間內對大量待測中藥守宮進行快速鑒定，效率高。

本發明要解決的第三個技術問題在于提供一種鑒定中藥守宮的方法，采用所述方法鑒定中藥守宮，鑒定結果準確、穩定、可靠、靈敏度高，能夠在短時間內對大量待測中藥守宮進行快速鑒定，效率高。

為此，本發明提供了一種用于鑒定中藥守宮的引物，所述引物如下：

上游引物：5′-CAACGGGGCCCTATATTCCG-3′；

下游引物：5′-AGGGTTGCGTATGGGGTTTC-3′。

本發明提供了一種鑒定中藥守宮的試劑盒，含有上述的引物。

所述的試劑盒，每支所述試劑盒包括各自獨立包裝的引物液部分和PCR反應液部分；所述PCR反應液部分含有用于進行PCR擴增的含Mg²⁺擴增緩沖液、dNTPs、Taq DNA聚合酶以及ddH₂O。

本發明還提供了一種所述的引物或所述的試劑盒在鑒定中藥守宮中的應用。

本發明提供了一種鑒定中藥守宮的方法，包括如下步驟：

(1)提取待測中藥守宮的總DNA，備用；

(2)以步驟(1)中提取的DNA為模板，采用如下引物進行PCR擴增：

上游引物：5′-CAACGGGGCCCTATATTCCG-3′；

下游引物：5′-AGGGTTGCGTATGGGGTTTC-3′。