[發(fā)明專利]一種鑒定中藥守宮的特異性引物、試劑盒及鑒別方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710254140.5
• 申請(qǐng)日: 2017-04-18
• 公開（公告）號(hào): CN106868194B
• 公開（公告）日: 2019-07-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李建生
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京建生藥業(yè)有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京三聚陽光知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11250
• 代理人: 李敏

1.一種鑒定中藥守宮的特異性引物，其特征在于，所述引物如下：

上游引物：5′-CAACGGGGCCCTATATTCCG-3′；

下游引物：5′-AGGGTTGCGTATGGGGTTTC-3′。

2.一種鑒定中藥守宮的試劑盒，其特征在于，含有權(quán)利要求1所述的引物。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，每支所述試劑盒包括各自獨(dú)立包裝的引物液部分和PCR反應(yīng)液部分；所述PCR反應(yīng)液部分含有用于進(jìn)行PCR擴(kuò)增的含Mg²⁺擴(kuò)增緩沖液、dNTPs、Taq DNA聚合酶以及ddH₂O。

4.一種如權(quán)利要求1所述的引物或權(quán)利要求2或3所述的試劑盒在鑒定中藥守宮中的應(yīng)用。

5.一種鑒定中藥守宮的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)提取待測(cè)中藥守宮的總DNA，備用；

(2)以步驟(1)中提取的DNA為模板，采用如下引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增：

上游引物：5′-CAACGGGGCCCTATATTCCG-3′；

下游引物：5′-AGGGTTGCGTATGGGGTTTC-3′；

(3)測(cè)定步驟(2)中所得的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的大小，若所述PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中含有100～250bp的DNA片段，則所述待測(cè)中藥守宮為真；反之，則所述待測(cè)中藥守宮為假。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中，所述PCR反應(yīng)體系包括：

DNA模板，100ng，2μL；

上游引物，10μM，1μL；

下游引物，10μM，1μL；

PCR SuperMix，10μL；

ddH₂O，8μL；

反應(yīng)總體積為22μL。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中，所述PCR擴(kuò)增程序如下：95℃預(yù)變性5min，95℃變性30s，50℃退火30s，72℃延伸30s，進(jìn)行30個(gè)循環(huán)，然后繼續(xù)72℃延伸5min，降溫至4℃，獲得的擴(kuò)增產(chǎn)物4℃保存。

8.根據(jù)權(quán)利要求5-7任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)中，所述100～250bp的DNA片段為110～150bp的DNA片段。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)中所述100～250bp的DNA片段為116bp的DNA片段。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述的116bp的DNA片段序列如SEQ IDNO：3所示。