[發明專利]用于鑒定金錢白花蛇的特異性引物、試劑盒及鑒別方法在審
| 申請號： | 201710254137.3 | 申請日： | 2017-04-18 |
| 公開（公告）號： | CN106834535A | 公開（公告）日： | 2017-06-13 |
| 發明（設計）人： | 李建生 | 申請（專利權）人： | 北京建生藥業有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京三聚陽光知識產權代理有限公司11250 | 代理人： | 李敏 |
| 地址： | 101500 北京*** | 國省代碼： | 北京;11 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 鑒定 金錢白花蛇 特異性 引物 試劑盒 鑒別方法 | ||
1.一種用于鑒定中藥金錢白花蛇的特異性引物，其特征在于，所述引物序列如下：
上游引物：5′-CCCGCTCCATAACCTTTCGT-3′；
下游引物：5′-TCAGTTCAGCCGAGTAAGGG-3′。
2.一種用于鑒定中藥金錢白花蛇的試劑盒，其特征在于，含有權利要求1所述的引物。
3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，每支所述試劑盒包括各自獨立包裝的引物液部分和PCR反應液部分；所述PCR反應液部分含有用于進行PCR擴增的含Mg2+擴增緩沖液、dNTPs、Taq DNA聚合酶以及ddH2O。
4.一種如權利要求1所述的引物或權利要求2或3所述的試劑盒在鑒定中藥金錢白花蛇中的應用。
5.一種鑒定中藥金錢白花蛇的方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)提取待測中藥金錢白花蛇的總DNA，備用；
(2)以步驟(1)中提取的DNA為模板，采用如下引物進行PCR擴增：
上游引物:5′-CCCGCTCCATAACCTTTCGT-3′；
下游引物:5′-TCAGTTCAGCCGAGTAAGGG-3′。
(3)測定步驟(2)中所得的PCR擴增產物的大小，若所述PCR擴增產物中含有100～250bp的DNA片段，則所述待測中藥金錢白花蛇為真；反之，則所述待測中藥金錢白花蛇為假。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中，所述PCR反應體系包括：
DNA模板，100ng，2μL；
上游引物，10μM，1μL；
下游引物，10μM，1μL；
PCR SuperMix，10μL；
ddH2O，8μL；
反應總體積為22μL。
7.根據權利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中，PCR擴增程序如下：95℃預變性5min，95℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，進行30個循環，然后繼續72℃延伸5min，降溫至4℃，獲得的擴增產物4℃保存。
8.根據權利要求5-7任一項所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)中，所述100～250bp的DNA片段為150～200bp的DNA片段。
9.根據權利要求5-8任一項所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)中，所述100～250bp的DNA片段為181bp的DNA片段。
10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，所述的181bp的DNA片段序列如SEQ ID NO：3所示。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于北京建生藥業有限公司，未經北京建生藥業有限公司許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201710254137.3/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
