[發(fā)明專利]檢測柑橘鐵螯合還原酶家族基因的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710253833.2 | 申請日： | 2017-04-18 |
| 公開（公告）號： | CN106834534B | 公開（公告）日： | 2020-09-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 姚利曉;陳善春;何永睿;許蘭珍;雷天剛;鄒修平;彭愛紅 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院柑桔研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/6851 | 分類號： | C12Q1/6851;C12Q1/6895 |
| 代理公司： | 重慶信航知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 50218 | 代理人： | 吳彬 |
| 地址： | 400712 重*** | 國省代碼： | 重慶;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 檢測 柑橘 鐵螯合 還原酶 家族 基因 方法 | ||
1.一種檢測柑橘鐵螯合還原酶家族基因的方法，其特征在于：包括以下步驟：
1)選取資陽香橙、卡里佐枳橙和枳的根、莖和葉用作表達(dá)分析的材料；
2)分別提取資陽香橙、卡里佐枳橙和枳的根、莖、葉組織的RNA；
3)以步驟2)提取的RNA為模板，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一條鏈；
4)熒光定量PCR；
柑橘中各鐵螯合還原酶基因的熒光定量引物分布于基因的不同外顯子區(qū)，引物的序列如下：
FRO1基因的上游引物為5'-AGGCACCCTTTACTACCTCCTAC-3'，下游引物為5'-GACAAGACTTCCCTTCGTTGATA-3'；
FRO2基因的上游引物為5'-CATGCTGGGCATTTCTCTTCTT-3'，下游引物為5'-GTTTCGCTCCATTCTAGCACCT-3'；
FRO3基因的上游引物為5′-CCAGCTTTGAGATTCTGTTGGT-3′，下游引物為5′-GGTACTTGAGTTGCCATGTGTT-3′；
FRO4基因的上游引物為5′-GACCTGAGCTAAAGAGGATGCT-3′，下游引物為5′-GCCAGACCAGATGAACAGATTG-3′；
FRO5基因的上游引物為5′-CCATTTTACAGGGCACGACAT-3′，下游引物為5′-ATTATTGGCCAAAGAGAGCAGC-3′；
PCR反應(yīng)體系為：SYBR GreenⅠ 20μL，iQ SYBR MIX 10μL，濃度為10μmol·L-1的上游引物和下游引物各0.3μL，cDNA 5μL，ddH2O 4.4μL；
選取看家基因Actin為內(nèi)參基因，采用溫度循環(huán)為94℃-60℃-72℃三步法進(jìn)行qRT-PCR，PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性1min；94℃10s，60℃15s，72℃15s，40個循環(huán)；
5)采用2△Ct法進(jìn)行計(jì)算分析試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)，2△Ct法即每百萬看家基因中鐵螯合還原酶基因數(shù)目＝106×2Ct(Actin)－Ct(FRO)。
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