[發明專利]一種在細胞微囊泡表面修飾配體的方法有效
| 申請號： | 201710252548.9 | 申請日： | 2017-04-18 |
| 公開（公告）號： | CN107022516B | 公開（公告）日： | 2020-08-21 |
| 發明（設計）人： | 田田;高雋;王靜;王梅;張卉馨;寇曉林 | 申請（專利權）人： | 南京醫科大學 |
| 主分類號： | C12N5/00 | 分類號： | C12N5/00 |
| 代理公司： | 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 肖明芳 |
| 地址： | 211166 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 細胞 微囊泡 表面 修飾 方法 | ||
1.一種在細胞微囊泡表面修飾配體的方法，其特征在于，包括如下步驟：
(a)在細胞微囊泡表面連接二苯基環辛炔；
(b)去除游離的二苯基環辛炔；
(c)在細胞微囊泡表面的二苯基環辛炔上連接疊氮基修飾的配體；
(d)對修飾好的細胞微囊泡進行提純；
步驟(a)中，利用雙功能化分子將二苯基環辛炔共價偶聯到細胞微囊泡表面天然存在的氨基末端上；其中，所述的雙功能化分子為同時帶有二苯基環辛炔和N-羥基琥珀酰亞胺的分子；
步驟(a)中，PBS緩沖液重懸細胞微囊泡，按照每1012細胞微囊泡數量加入1nmol～20nmol雙功能化分子的比例混合，在室溫下反應2～12小時；
步驟(c)中，利用疊氮化的配體與細胞微囊泡表面的二苯基環辛炔進行無銅點擊化學反應，從而將配體共價偶聯在細胞微囊泡表面；
步驟(c)中，步驟(b)的產物與疊氮化的配體在PBS緩沖液中混勻，在4℃下反應4～24小時，其中，每1012囊泡微粒數加入0.1nmol～5nmol疊氮化的配體。
2.根據權利要求1所述的在細胞微囊泡表面修飾配體的方法，其特征在于，所述細胞微囊泡為人、動物、植物或微生物的細胞所分泌或破碎后獲得的，具有脂質膜結構的囊泡。
3.根據權利要求1或2所述的在細胞微囊泡表面修飾配體的方法，其特征在于，所述細胞微囊泡為細胞外囊泡、微囊泡、外泌體、調亡小體、脫落囊泡或微粒。
4.根據權利要求1所述的在細胞微囊泡表面修飾配體的方法，其特征在于，所述的雙功能化分子為DBCO-sulfo-NHS、或DBCO-NHS、或DBCO-PEG4-NHS。
5.根據權利要求1所述的在細胞微囊泡表面修飾配體的方法，其特征在于，步驟(b)中，通過超濾去除沒有偶聯在細胞微囊泡上的雙功能化分子。
6.根據權利要求1所述的在細胞微囊泡表面修飾配體的方法，其特征在于，步驟(c)中，所述配體為肽、蛋白質、核酸或高分子化合物。
7.根據權利要求1所述的在細胞微囊泡表面修飾配體的方法，其特征在于，所述的疊氮化的配體是將Azide-sulfo-NHS、或Azide-NHS、或Azide-PEG4-NHS與配體按照摩爾比10：1混合，在室溫下反應2～12小時，獲得疊氮化的配體。
8.根據權利要求1所述的在細胞微囊泡表面修飾配體的方法，其特征在于，步驟(d)中，使用超速離心的方法對修飾好的細胞微囊泡進行提純。
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