[發(fā)明專利]一種在細胞微囊泡表面修飾配體的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710252548.9 | 申請日： | 2017-04-18 |
| 公開（公告）號： | CN107022516B | 公開（公告）日： | 2020-08-21 |
| 發(fā)明（設計）人： | 田田;高雋;王靜;王梅;張卉馨;寇曉林 | 申請（專利權）人： | 南京醫(yī)科大學 |
| 主分類號： | C12N5/00 | 分類號： | C12N5/00 |
| 代理公司： | 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 肖明芳 |
| 地址： | 211166 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 細胞 微囊泡 表面 修飾 方法 | ||
1.一種在細胞微囊泡表面修飾配體的方法，其特征在于，包括如下步驟：
(a)在細胞微囊泡表面連接二苯基環(huán)辛炔；
(b)去除游離的二苯基環(huán)辛炔；
(c)在細胞微囊泡表面的二苯基環(huán)辛炔上連接疊氮基修飾的配體；
(d)對修飾好的細胞微囊泡進行提純；
步驟(a)中，利用雙功能化分子將二苯基環(huán)辛炔共價偶聯(lián)到細胞微囊泡表面天然存在的氨基末端上；其中，所述的雙功能化分子為同時帶有二苯基環(huán)辛炔和N-羥基琥珀酰亞胺的分子；
步驟(a)中，PBS緩沖液重懸細胞微囊泡，按照每1012細胞微囊泡數(shù)量加入1nmol～20nmol雙功能化分子的比例混合，在室溫下反應2～12小時；
步驟(c)中，利用疊氮化的配體與細胞微囊泡表面的二苯基環(huán)辛炔進行無銅點擊化學反應，從而將配體共價偶聯(lián)在細胞微囊泡表面；
步驟(c)中，步驟(b)的產物與疊氮化的配體在PBS緩沖液中混勻，在4℃下反應4～24小時，其中，每1012囊泡微粒數(shù)加入0.1nmol～5nmol疊氮化的配體。
2.根據權利要求1所述的在細胞微囊泡表面修飾配體的方法，其特征在于，所述細胞微囊泡為人、動物、植物或微生物的細胞所分泌或破碎后獲得的，具有脂質膜結構的囊泡。
3.根據權利要求1或2所述的在細胞微囊泡表面修飾配體的方法，其特征在于，所述細胞微囊泡為細胞外囊泡、微囊泡、外泌體、調亡小體、脫落囊泡或微粒。
4.根據權利要求1所述的在細胞微囊泡表面修飾配體的方法，其特征在于，所述的雙功能化分子為DBCO-sulfo-NHS、或DBCO-NHS、或DBCO-PEG4-NHS。
5.根據權利要求1所述的在細胞微囊泡表面修飾配體的方法，其特征在于，步驟(b)中，通過超濾去除沒有偶聯(lián)在細胞微囊泡上的雙功能化分子。
6.根據權利要求1所述的在細胞微囊泡表面修飾配體的方法，其特征在于，步驟(c)中，所述配體為肽、蛋白質、核酸或高分子化合物。
7.根據權利要求1所述的在細胞微囊泡表面修飾配體的方法，其特征在于，所述的疊氮化的配體是將Azide-sulfo-NHS、或Azide-NHS、或Azide-PEG4-NHS與配體按照摩爾比10：1混合，在室溫下反應2～12小時，獲得疊氮化的配體。
8.根據權利要求1所述的在細胞微囊泡表面修飾配體的方法，其特征在于，步驟(d)中，使用超速離心的方法對修飾好的細胞微囊泡進行提純。
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