[發(fā)明專利]一種高通量的單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710250076.3
• 申請(qǐng)日: 2017-04-17
• 公開（公告）號(hào): CN107400705A
• 公開（公告）日: 2017-11-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王磊;李貴波
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳華大基因研究院
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12N15/10
• 代理公司: 深圳鼎合誠知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司44281
• 代理人: 孫銀行,彭家恩

1.一種高通量的單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增方法，其特征在于，所述方法包括：

采用納升級(jí)的微量分液平臺(tái)將具有預(yù)定細(xì)胞密度的細(xì)胞懸液分配到納升級(jí)的微孔芯片的每個(gè)微孔中；

采用所述微量分液平臺(tái)將細(xì)胞裂解液分配到所述微孔中以裂解所述微孔內(nèi)的細(xì)胞；

采用所述微量分液平臺(tái)將中和液分配到所述微孔中以進(jìn)行中和反應(yīng)；

采用所述微量分液平臺(tái)將全基因組擴(kuò)增試劑分配到所述微孔中以進(jìn)行全基因組擴(kuò)增反應(yīng)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述全基因組擴(kuò)增反應(yīng)的同時(shí)采用熒光定量PCR儀輔助監(jiān)測(cè)單細(xì)胞擴(kuò)增情況。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述預(yù)定細(xì)胞密度是指2-4個(gè)細(xì)胞/微升。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，分配到所述微孔中的細(xì)胞懸液、細(xì)胞裂解液、中和液和全基因組擴(kuò)增試劑的體積分別是35-50納升、35-50納升、35-50納升和100-150納升；

優(yōu)選地，分配到所述微孔中的細(xì)胞懸液、細(xì)胞裂解液、中和液和全基因組擴(kuò)增試劑的體積分別是35納升、35納升、35納升和100納升。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述微孔芯片的每個(gè)微孔的容積為不小于250納升。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，將所述細(xì)胞懸液、細(xì)胞裂解液、中和液和全基因組擴(kuò)增試劑分配到所述微孔中后，通過離心去除氣泡。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述熒光定量PCR儀輔助監(jiān)測(cè)單細(xì)胞擴(kuò)增情況中，以溶解曲線為單峰，同時(shí)Ct值介于陽性對(duì)照與陰性對(duì)照的數(shù)值之間，作為單細(xì)胞擴(kuò)增產(chǎn)物的標(biāo)志；其中所述陽性對(duì)照是總DNA，所述陰性對(duì)照是不含細(xì)胞的等滲溶液。

8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法還包括：去除最低和最高10% Ct值的樣品。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述細(xì)胞裂解液包含200mM的KOH，100mM的DTT和5mM的EDTA；所述中和液包含333mM的Tris-HCl和125mM的HCl。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法還包括：吸取符合單細(xì)胞擴(kuò)增產(chǎn)物的標(biāo)志的樣品，使用看家基因的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增檢測(cè)，選擇PCR擴(kuò)增結(jié)果顯示多條帶的樣品進(jìn)行建庫上機(jī)測(cè)序。