[發明專利]一種乙草胺檢測酶聯免疫試劑盒

有效

• 申請號: 201710249637.8
• 申請日: 2017-04-17
• 公開（公告）號: CN106841598B
• 公開（公告）日: 2019-02-19
• 發明（設計）人: 何艷平;徐毓琴;蒲小容;石潔;郭艷琴
• 申請（專利權）人: 四川精衛食品檢測科技有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/535
• 代理公司: 成都睿道專利代理事務所(普通合伙) 51217
• 代理人: 趙云

本發明涉及一種乙草胺檢測酶聯免疫試劑盒，包括酶標板、酶標記物工作液、乙草胺特異性抗體濃縮液、洗滌工作液、復溶工作液和TMB顯色液，其中，所述酶標板的微孔條上預包被乙草胺偶聯抗原，所述酶標記物工作液為酶標記抗抗體工作液。本發明乙草胺檢測酶聯免疫試劑盒，是應用ELISA技術研發的新一代藥物殘留檢測產品，與傳統儀器分析技術相比，具有檢測快速、簡便、準確，低成本以及檢測靈敏度高等特點，能最大限度地減少操作誤差和工作強度。

技術領域

本發明涉及一種乙草胺檢測酶聯免疫試劑盒，屬于生物工程技術領域。

背景技術

針對乙草胺的檢測中，現有國標等相關檢測方法為氣相、液相或氣質連用等方法，該類方法儀器設備采購成本高，人員要求高、試劑耗材昂貴、檢測周期長。

發明內容

本發明的目的在于提供一種乙草胺檢測酶聯免疫試劑盒，以便更好地針對乙草胺進行檢測。

為了實現上述目的，本發明的技術方案如下。

一種乙草胺檢測酶聯免疫試劑盒，包括酶標板、酶標記物工作液、乙草胺特異性抗體濃縮液、洗滌工作液、復溶工作液和TMB顯色液，其中，所述酶標板的微孔條上預包被乙草胺偶聯抗原，所述酶標記物工作液為酶標記抗抗體工作液，具體為：

(1)洗滌工作液，濃縮洗滌液1：19體積比稀釋而成，所述濃縮洗滌液為pH值為7.1～7.5，含有0.8％～1.2％吐溫-20、0.01％～0.03％硫柳汞防腐劑、0.01～0.03mol/L的磷酸鹽緩沖液，所述百分比為重量體積百分比；

(2)復溶工作液，濃縮復溶液1：1體積比稀釋而成，pH值為7.2～7.7，含有8％～12％卵清蛋白、0.1～0.4mol/L的磷酸鹽緩沖液，所述百分比為重量體積百分比；

(3)TMB顯色液，包括TMB底物液A液和TMB底物液B液，A液為過氧化氫，B液為鄰苯二胺或四甲基聯苯胺；

(4)終止液，0.5mol/L的鹽酸緩沖液；

(5)酶標板為96孔酶標板，其中在酶標板制備過程中所用的包被緩沖液為pH值為9.6，0.05mol/L的碳酸鹽緩沖液，所用封閉液為pH值為9.1～9.5，含有3％～10％小牛血清、0.2％吐溫-20、0.1～0.3mol/L的碳酸鹽緩沖液，所述百分比為重量體積百分比；本發明中酶標板的制備過程為，用包被緩沖液將包被原稀釋成0.1～0.2μg/ml，每孔加入100μl，37℃溫育2h或4℃過夜，傾去包被液，用洗滌液洗滌2次，每次30s，拍干，然后在每孔中加入150～200μl封閉液37℃溫育1～2h，傾去孔內液體拍干，干燥后用鋁膜真空；

(6)其中，本發明乙草胺特異性抗體的制備流程為：將這兩種抗原注入到小鼠進行免疫反應，最終得到兩種針對不同乙草胺結構的抗體。

(7)酶標二抗工作液，本實施例酶標二抗采用羊抗鼠抗抗體，以羊作為免疫動物，以鼠源抗體為免疫原，對無病原體羊進行免疫，得到羊抗鼠抗抗體；酶標二抗通過稀釋，酶標二抗得到工作液，稀釋處理同現有技術；

(8)乙草胺標準溶液，濃度分別為0μg/L、0.5μg/L、1.5μg/L、4.5μg/L、13.5μg/L和40.5μg/L；其中標準品稀釋液為PH值7.4的0.02mol/L磷酸鹽緩沖液。

進一步地，乙草胺抗原合成路線為：乙草胺溶于甲氫呋喃中，氮氣保護下加熱攪拌加入巰基丙酸，K2CO3做催化劑，用TLC薄層板監測反應進行，直至沒有原料或原料點很淺，停止反應，凈化，甲醇重結晶，得水解產物。