[發明專利]石油降解菌的培養方法

在審

• 申請號: 201710248046.9
• 申請日: 2017-04-17
• 公開（公告）號: CN107058104A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發明（設計）人: 張峰
• 申請（專利權）人: 西安華諾環保股份有限公司
• 主分類號: C12N1/00
• 分類號: C12N1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種石油降解菌的培養方法。

背景技術

據估計全世界每年約有1×109噸石油及其產品通過各種途徑進入地下水、地表水及土壤中，隨著經濟的高速增長，我國石油的環境治理任務也日益緊迫投加高效石油降解菌以強化石油類污染物的降解，以達到治理石油污染環境的目的勢在必行。一般情況下，化學物理的處理方法成本較高并且存在二次污染，然而微生物處理相對成本較低、綠色環保。在油田污水處理領域，微生物技術應用廣泛，但是存在的最大問題是原油為底物的高效降解石油功能菌的缺乏。

發明內容

為克服現有技術的缺陷，本發明提供一種石油降解菌的培養方法，本發明的技術方案是：

一種石油降解菌的培養方法，包括以下步驟：

(1)制備石油降解菌培養基，具體制備方法如下：蛋白胨10份，牛肉膏粉5份，瓊脂粉18份，氯化鈉5份，按照成分比例制備石油降解菌培養基，并在微波爐加熱，加熱時間：2min，加熱溫度：80℃，至瓊脂完全融化為止，放入高壓滅菌鍋進行滅菌，滅菌溫度121℃，時間30min，然后在生物安全柜內倒入已滅菌的干燥培養皿內，每個培養皿倒入15ml，將倒好培養基的培養皿放在安全柜內至冷卻，冷卻時間：5h，冷卻溫度：室溫25℃，冷卻后可放入冰箱冷藏備用；

(2)將石油降解菌活化在石油降解菌培養基中，然后在超凈工作臺內對石油降解菌進行平板涂布，同時將石油降解菌溶液濃度進行梯度稀釋，分別稀釋到10的-2次方，10的-4次方、10的-6次方以及10的-8次方。

(3)用移液槍取稀釋好的石油降解菌溶液分別200微升，分別注入在培養皿內的石油降解菌培養基上，用涂布棒將石油降解菌溶液涂布均勻，并用記號筆在培養皿的底部進行標注，然后放入35℃的恒溫培養箱中，進行培養，1-2天后，觀察石油降解菌的生長情況，用記號筆分別劃出培養基上生長的不同形態的石油降解菌，并標注序號，然后對標注的石油降解菌進行平板劃線；

(4)將劃好的平板放入恒溫培養箱，35℃，培養1-2天，觀察平板上石油降解菌的生長，并對生長好的石油降解菌進行染色鏡檢，記錄其形態特征，重復該操作，直至顯微鏡下觀察的石油降解菌形態完全純化為止，將純化的石油降解菌進行在試管斜面培養基中進行斜面劃線保藏。

所述的步驟(2)中具體稀釋方法為：用注射器取10ml蒸餾水放入試管中，將蒸餾水進行滅菌，在生物安全柜內，用移液槍取100微升的菌株溶液，注入到無菌蒸餾水的試管中，此時，該試管中的菌株溶液濃度為10的-2次方，同樣方法，將菌株溶液分別稀釋到10的-4次方、10的-6次方以及10的-8次方。

所述的步驟(3)平板劃線方法如下：在生物安全柜內，點燃酒精燈，用接種環頂部輕觸標序號的石油降解菌，劃在石油降解菌培養基上，每一序號的石油降解菌在培養基上劃四區，每劃一區將接種環放在酒精燈上燃燒，重復操作。

所述的步驟(4)試管斜面培養基的制備方法：稱取蛋白胨10g/L，牛肉膏粉5g/L，瓊脂粉18g/L，氯化鈉5g/L，按照配比進行混合，混合后在微波爐中加熱，加熱時間：1-2min，加熱溫度：70-80℃，至瓊脂粉完全融化為止，用10ml的注射器取5ml注入試管中，將試管放入2L的燒杯進行包扎，然后放入高壓滅菌鍋進行滅菌，滅菌121℃，時間30min，滅菌后，將試管取出擺斜面，斜面的擺放標準是斜面上營養瓊脂培養基的長度不超過整個試管長度的2/3，靜置8h，待冷凝后，放入冰箱冷藏即可。

本發明的優點是：經過本發明培養的石油降解菌，抗低溫性能好，耐鹽性能好，適合于油田污水處理的實際情況，而且不會污染環境。

具體實施方式

下面結合具體實施例來進一步描述本發明，本發明的優點和特點將會隨著描述而更為清楚。但這些實施例僅是范例性的，并不對本發明的范圍構成任何限制。本領域技術人員應該理解的是，在不偏離本發明的精神和范圍下可以對本發明技術方案的細節和形式進行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發明的保護范圍內。

本發明涉及一種石油降解菌的培養方法，包括以下步驟：