[發(fā)明專利]石油降解菌的培養(yǎng)方法

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• 申請日: 2017-04-17
• 公開（公告）號: CN107058104A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張峰
• 申請（專利權(quán)）人: 西安華諾環(huán)保股份有限公司
• 主分類號: C12N1/00
• 分類號: C12N1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種石油降解菌的培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)制備石油降解菌培養(yǎng)基，具體制備方法如下：蛋白胨10份，牛肉膏粉5份，瓊脂粉18份，氯化鈉5份，按照成分比例制備石油降解菌培養(yǎng)基，并在微波爐加熱，加熱時間：2min，加熱溫度：80℃，至瓊脂完全融化為止，放入高壓滅菌鍋進行滅菌，滅菌溫度121℃，時間30min，然后在生物安全柜內(nèi)倒入已滅菌的干燥培養(yǎng)皿內(nèi)，每個培養(yǎng)皿倒入15ml，將倒好培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿放在安全柜內(nèi)至冷卻，冷卻時間：5h，冷卻溫度：室溫25℃，冷卻后可放入冰箱冷藏備用；

(2)將石油降解菌活化在石油降解菌培養(yǎng)基中，然后在超凈工作臺內(nèi)對石油降解菌進行平板涂布，同時將石油降解菌溶液濃度進行梯度稀釋，分別稀釋到10的-2次方，10的-4次方、10的-6次方以及10的-8次方。

(3)用移液槍取稀釋好的石油降解菌溶液分別200微升，分別注入在培養(yǎng)皿內(nèi)的石油降解菌培養(yǎng)基上，用涂布棒將石油降解菌溶液涂布均勻，并用記號筆在培養(yǎng)皿的底部進行標(biāo)注，然后放入35℃的恒溫培養(yǎng)箱中，進行培養(yǎng)，1-2天后，觀察石油降解菌的生長情況，用記號筆分別劃出培養(yǎng)基上生長的不同形態(tài)的石油降解菌，并標(biāo)注序號，然后對標(biāo)注的石油降解菌進行平板劃線；

(4)將劃好的平板放入恒溫培養(yǎng)箱，35℃，培養(yǎng)1-2天，觀察平板上石油降解菌的生長，并對生長好的石油降解菌進行染色鏡檢，記錄其形態(tài)特征，重復(fù)該操作，直至顯微鏡下觀察的石油降解菌形態(tài)完全純化為止，將純化的石油降解菌進行在試管斜面培養(yǎng)基中進行斜面劃線保藏。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的石油降解菌的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的步驟(2)中具體稀釋方法為：用注射器取10ml蒸餾水放入試管中，將蒸餾水進行滅菌，在生物安全柜內(nèi)，用移液槍取100微升的菌株溶液，注入到無菌蒸餾水的試管中，此時，該試管中的菌株溶液濃度為10的-2次方，同樣方法，將菌株溶液分別稀釋到10的-4次方、10的-6次方以及10的-8次方。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的石油降解菌的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的步驟(3)平板劃線方法如下：在生物安全柜內(nèi)，點燃酒精燈，用接種環(huán)頂部輕觸標(biāo)序號的石油降解菌，劃在石油降解菌培養(yǎng)基上，每一序號的石油降解菌在培養(yǎng)基上劃四區(qū)，每劃一區(qū)將接種環(huán)放在酒精燈上燃燒，重復(fù)操作。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的石油降解菌的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的步驟(4)試管斜面培養(yǎng)基的制備方法：稱取蛋白胨10g/L，牛肉膏粉5g/L，瓊脂粉18g/L，氯化鈉5g/L，按照配比進行混合，混合后在微波爐中加熱，加熱時間：1-2min，加熱溫度：70-80℃，至瓊脂粉完全融化為止，用10ml的注射器取5ml注入試管中，將試管放入2L的燒杯進行包扎，然后放入高壓滅菌鍋進行滅菌，滅菌121℃，時間30min，滅菌后，將試管取出擺斜面，斜面的擺放標(biāo)準是斜面上營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的長度不超過整個試管長度的2/3，靜置8h，待冷凝后，放入冰箱冷藏即可。