[發明專利]一種表達抗HIV雙特異性抗體的微環DNA載體及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201710245144.7
• 申請日: 2017-04-14
• 公開（公告）號: CN108728464A
• 公開（公告）日: 2018-11-02
• 發明（設計）人: 謝亦武
• 申請（專利權）人: 深圳新諾微環生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C07K16/46;A61K39/42;A61P31/18
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務所 11430
• 代理人: 郎堅

本申請涉及一種表達抗HIV雙特異性抗體的微環DNA載體及其制備方法和應用。具體涉及一種用于在體內表達抗HIV雙特異性抗體的微環DNA載體。所述抗HIV雙特異性抗體結合HIV感染細胞，還能中和游離的HIV病毒。所述微環DNA載體、雙特異性抗體用于預防或治療艾滋病或HIV感染等病癥。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，具體涉及一種重組基因載體，更具體為一種用于在體內表達抗HIV雙特異性抗體的微環DNA載體(MC.anti-HIV.BsAb)。

背景技術

人免疫缺陷病毒(HIV)感染嚴重威脅人類健康。HIV病毒感染細胞后，病毒基因組會整合進細胞基因組，形成原病毒(Protovirus)，作為病毒持續復制的模板。現有抗病毒治療手段能抑制病毒復制，控制病毒載量，然而卻無法徹底消滅帶原病毒的細胞，從而清除原病毒庫。只有清除受感染的細胞，才能實現清除原病毒庫之目的。研究表明，部分HIV感染者機體免疫系統能產生廣譜的HIV中和抗體，既能清除游離的病毒顆粒，也能通過ADCC作用清除受感染的細胞(如：CD4⁺細胞等)。但是ADCC介導的細胞殺傷作用有限，無法清除所有的感染細胞。

有證據表明，通過同時連接靶細胞和效應細胞(如：CD3⁺T細胞或CD16⁺NK細胞)，雙特異性抗體可介導效應細胞對靶細胞的高效殺傷作用，比ADCC介導的殺傷效果強成千上萬倍，特別適合于抗HIV治療。此外，HIV處于隱匿狀態時，病毒抗原不表達或處于極低表達水平，機體免疫和藥物無法起作用。而CD3抗體對T細胞有激活作用，處于激活狀態的T細胞轉錄活性增加，會促進靶細胞蛋白(包括整合于細胞基因組的病毒抗原)表達，使得雙特異性抗體能夠靶向作用于這些隱匿的感染細胞。與該發明最接近的技術是利用AAV載體表達HIV中和抗體AAV-anti-HIV(WO2012115980)，或者在體外表達純化HIV雙特異性抗體蛋白(WO2016054053)。

然而，現有的AAV表達抗體技術存在缺點，包括成本高昂、安全性隱患。具體包括：(a)AAV病毒載體的包裝、純化過程復雜，需要大量細胞培養，耗時耗力；(b)AAV病毒的保存、運輸等過程需要低溫環境，造成成本上升及使用不便；(c)AAV病毒外殼容易激起強烈的免疫反應，而且載體中攜帶的DNA序列隨機插入容易導致基因突變，甚至致癌風險。

同樣的，通過細胞培養在體外表達純化HIV抗體的缺點主要是成本高昂，使用不便。具體包括：(a)抗體體外表達純化工藝復雜，花費巨大；(b)蛋白保存、運輸通常需要低溫環境，要求較苛刻；(c)抗體使用需通過靜脈或皮下注射，半衰期有限、需長期使用，加大了患者負擔。

本發明旨在利用重組基因載體，尤其是微環DNA載體在體內表達抗HIV雙特異性抗體(MC.anti-HIV.BsAb)，用于預防或治療艾滋病，清除HIV感染。

發明內容

本發明涉及一種用于在體內表達抗HIV雙特異性抗體的重組基因載體(尤其是微環DNA載體MC.anti-HIV.BsAb)，起到清除HIV感染細胞的作用。由于本發明的抗體抗HIV的部分來源于廣泛中和抗體，因此表達的抗HIV雙特異性抗體也能起到中和游離HIV病毒的作用。

本發明提供了一種表達抗HIV雙特異性抗體的重組基因載體，所述雙特異性抗體包括與HIV感染細胞特異性結合的第一抗原結合結構域，和與效應細胞特異性結合的第二抗原結合結構域；優選的，所述雙特異性抗體還能中和游離的HIV病毒。

在一個實施方案中，優選的，所述重組基因載體選自非病毒基因載體；更優選的，所述重組基因載體選自微環DNA載體。

在一個實施方案中，所述效應細胞包括T細胞或NK細胞。優選的，所述第二抗原結合結構域特異性結合選自以下的作用靶點：CD3、CD28、4-1BB、OX40、TCR、CD16、CD56、NKG2D、NCR和其它。