[發明專利]一種表達抗HIV雙特異性抗體的微環DNA載體及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201710245144.7
• 申請日: 2017-04-14
• 公開（公告）號: CN108728464A
• 公開（公告）日: 2018-11-02
• 發明（設計）人: 謝亦武
• 申請（專利權）人: 深圳新諾微環生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C07K16/46;A61K39/42;A61P31/18
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務所 11430
• 代理人: 郎堅

1.一種表達抗HIV雙特異性抗體的重組基因載體，其特征在于，所述雙特異性抗體包括與HIV感染細胞特異性結合的第一抗原結合結構域，和與效應細胞特異性結合的第二抗原結合結構域；優選的，所述重組基因載體選自非病毒基因載體；更優選的，所述重組基因載體選自微環DNA載體；再優選的，所述雙特異性抗體還能中和游離的HIV病毒；更優選的，所述效應細胞包括T細胞或NK細胞；最優選的，所述第二抗原結合結構域特異性結合選自以下的作用靶點：CD3、CD28、4-1BB、OX40、TCR、CD16、CD56、NKG2D、NCR和其它。

2.如權利要求1所述的重組基因載體，其特征在于，所述第一抗原結合結構域包含：如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的重鏈可變區，和如SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的輕鏈可變區；以及，所述第二抗原結合結構域包含：如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的重鏈可變區，和如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的輕鏈可變區。

3.如權利要求1或2所述的重組基因載體，其特征在于，所述重組基因載體包含所述雙特異性抗體的編碼基因。

4.如權利要求3所述的重組基因載體，其特征在于，所述編碼基因的核苷酸序列如SEQID NO:5所示。

5.如權利要求1-4中任一項所述的重組基因載體所表達的雙特異性抗體。

6.如權利要求中1-4任一項所述的重組基因載體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)獲取HIV中和抗體及其重鏈可變區和輕鏈可變區的氨基酸序列；

(2)獲取識別效應細胞的抗體及其重鏈可變區和輕鏈可變區的氨基酸序列；

(3)構建表達抗HIV雙特異性抗體的重組基因載體；

任選的，(4)在體內外鑒定所述雙特異性抗體的表達水平,并檢測其對HIV感染細胞的清除作用。

7.如權利要求6所述的制備方法，其特征在于，在所述步驟(1)中，(a)從現有技術中獲取HIV中和抗體的重鏈可變區和輕鏈可變區的氨基酸序列，或者(b)分離HIV抗體陽性患者血清中的HIV特異性中和單克隆抗體，隨后對所述抗體的可變區測序；在所述步驟(2)中，從現有技術中獲取識別效應細胞的抗體的重鏈可變區和輕鏈可變區的氨基酸序列；優選的，所述效應細胞包括T細胞或NK細胞；更優選的，所述識別效應細胞的抗體特異性結合選自以下的作用靶點：CD3、CD28、4-1BB、OX40、TCR、CD16、CD56、NKG2D、NCR和其它。

8.一種宿主細胞，其特征在于，包含如權利要求1-4中任一項所述的重組基因載體，或如權利要求6或7所述的制備方法所得到的重組基因載體。

9.一種藥物組合物，其特征在于，包含如1-4中任一項所述的重組基因載體或如權利要求5所述的雙特異性抗體，以及藥學上可接受的載體。

10.如權利要求1-4中任一項所述的重組基因載體，如權利要求5所述的雙特異性抗體，如權利要求8所述的宿主細胞或如權利要求9所述的藥物組合物在制備預防或治療艾滋病或HIV感染的藥物中的應用。