[發明專利]從豬皮中提取膠原蛋白的酸酶結合法

在審

• 申請號: 201710244376.0
• 申請日: 2017-04-14
• 公開（公告）號: CN106866816A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發明（設計）人: 佘延英
• 申請（專利權）人: 桂林融通科技有限公司
• 主分類號: C07K14/78
• 分類號: C07K14/78;C12P21/06;C07K1/30;C07K1/14
• 代理公司: 桂林市持衡專利商標事務所有限公司45107
• 代理人: 廖世傳

技術領域

本發明涉及活性膠原蛋白肽的提取工藝，具體涉及從豬皮中提取膠原蛋白的酸酶結合法。

背景技術

膠原蛋白又叫膠原，是一種含糖蛋白質，在自然界分布廣泛，主要分布在哺乳動物的結締組織中，作為皮膚、骨骼、肌腱、韌帶、血管的構成材料。膠原特有的空間結構賦予其優異的理化性質和生物活性-生物相容性、生物可降解性和低抗原性等，從而成為目前研究和應用最為廣泛的一類結構蛋白，在食品、化妝品、組織工程和生物醫學材料等領域得到了廣泛應用。

目前，從動物組織中提取膠原的方法主要有單獨使用或聯用酸法、堿法、酶解法及熱水抽提法。其中，酸法、堿法和熱水抽提法膠原溶出率很低，且酸法、堿法對環境污染嚴重，水抽提法得到的往往是膠原的變性產物，而酶法轉移性強、破壞性小，能更好地獲得活性膠原，但水解不夠徹底。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明的目的是從豬皮中提取膠原蛋白的酸酶結合法，本提取方法采用醋酸和胃蛋白酶相結合，對環境無污染、保留活性成分，且提取率高，同時提高豬皮的利用率。

為了達到上述目的，本發明采取的技術方案是：

從豬皮中提取膠原蛋白的酸酶結合法，包括以下步驟：

(1)將豬皮皮下脂肪和表面的毛發剔除干凈，利用蒸餾水徹底洗凈后，切成豬皮小顆粒狀，再用蒸餾水潤洗一遍，瀝干水；

(2)在40℃條件下，用體積比為5:3的異丙醇個乙酸乙酯混合有機溶劑，按照料液比為1:4m/v對豬皮顆粒脫脂4.5h，然后用蒸餾水反復潤洗豬皮顆粒直至無有機溶劑氣味，瀝干水后，置于-20℃條件下保存備用；

(3)將脫脂后的豬皮顆粒置于醋酸中，按與豬皮質量比為0.012～0.013mg/g加入胃蛋白酶，置于溫度為3～5℃的條件下提取55～65h；

(4)待提取結束后，加入氯化鈉粉末進行鹽析出膠原絮狀沉淀，然后將膠原絮狀沉淀溶于0.4mol/L醋酸溶液中，再注入透析袋內并先后于0.02mol/L的磷酸鈉溶液和蒸餾水中透析3～4天后，用硝酸銀溶液檢測透析液至無渾濁現象為止，真空冷凍干燥后即可得到產品。

作為優選技術方案，為了使豬皮中的膠原蛋白盡可能溶解于胃蛋白酶，有利于提高膠原蛋白的提取率，同時避免胃蛋白酶的浪費，所述步驟(3)中加入胃蛋白酶與豬皮的質量比0.0125mg/g。

作為優選技術方案，為了使豬皮中的膠原蛋白盡可能溶解于胃蛋白酶，有利于提高膠原蛋白的提取率，同時防止提取過長浪費能源，所述步驟(3)中提取60h。

作為優選技術方案，為了保證溫度合適，使豬皮中的膠原蛋白盡可能溶解于胃蛋白酶，有利于提高膠原蛋白的提取率，所述步驟(3)中置于溫度為4℃的條件下提取。

作為優選技術方案，為了盡可能使豬皮中的膠原蛋白都溶解出來，提高提取率，同時防止豬皮顆粒太小損壞膠原蛋白，所述步驟(1)中的豬皮小顆粒狀的規格為4.5mm×4.5mm。

與現有技術相比，本發明具有的效益：本發明采用醋酸和胃蛋白酶相結合提取，一方面對環境無污染，另一方面完好保留膠原蛋白的活性成分，同時在酶用量為0.0125mg/g、提取時間60h、提取溫度為4℃最優提取條件下提取，膠原蛋白的提取率高達19.87％，提取率高，且使豬皮得到最大利用價值，且該方法簡單、易于操作、提取成本低，適合工業化生產。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明作進一步地說明。

實施例1

從豬皮中提取膠原蛋白的酸酶結合法，包括以下步驟：

(1)將豬皮皮下脂肪和表面的毛發剔除干凈，利用蒸餾水徹底洗凈后，切成4.5mm×4.5mm的豬皮小顆粒狀，再用蒸餾水潤洗一遍，瀝干水；

(2)在40℃條件下，用體積比為5:3的異丙醇個乙酸乙酯混合有機溶劑，按照料液比為1:4m/v對豬皮顆粒脫脂4.5h，然后用蒸餾水反復潤洗豬皮顆粒直至無有機溶劑氣味，瀝干水后，置于-20℃條件下保存備用；

(3)將脫脂后的豬皮顆粒置于醋酸中，按與豬皮質量比為0.012mg/g加入胃蛋白酶，置于溫度為3℃的條件下提取55h；

(4)待提取結束后，加入氯化鈉粉末進行鹽析出膠原絮狀沉淀，然后將膠原絮狀沉淀溶于0.4mol/L醋酸溶液中，再注入透析袋內并先后于0.02mol/L的磷酸鈉溶液和蒸餾水中透析3～4天后，用硝酸銀溶液檢測透析液至無渾濁現象為止，真空冷凍干燥后即可得到產品。

實施例2

從豬皮中提取膠原蛋白的酸酶結合法，包括以下步驟：