[發明專利]一株高效產殼聚糖酶的鮭亞科腎桿菌菌株QD-01及其發酵方法和應用

有效

• 申請號: 201710243893.6
• 申請日: 2017-04-14
• 公開（公告）號: CN108728370B
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 畢旺華;王世欣;管華詩
• 申請（專利權）人: 青島海洋生物醫藥研究院股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/42;C12P19/26;C12P19/14;C12R1/01
• 代理公司: 青島合創知識產權代理事務所(普通合伙) 37264
• 代理人: 王曉曉

本發明提供了一株高效產殼聚糖酶的鮭亞科腎桿菌菌株QD?01及其發酵方法和應用。本發明對篩選到的菌株進行了發酵條件的優化研究，其中包括對產殼聚糖酶的單因素條件的優化和正交實驗優化，獲得了最佳的產酶條件。所述菌株產生的殼聚糖酶適應溫度范圍為35~60℃；pH為4.0~9.0；將該殼聚糖酶發酵液及凍干粗酶粉的酶活進行了比較，結果發現粗酶粉酶活基本不變，因此該制劑可凍干成粉，便于儲存運輸。本發明采用發酵產生的殼聚糖酶對殼寡糖制備工藝進行了摸索，縮短了殼寡糖的制備周期；而且該殼聚糖酶具有高度專一性。本發明提供的菌株以及制備得到的殼聚糖酶具有廣泛的市場應用前景。

技術領域

本發明屬于微生物技術領域，具體涉及一株高效產殼聚糖酶的鮭亞科腎桿菌菌株QD-01及其發酵方法和應用。

背景技術

目前生物法即通過殼聚糖酶來降解殼聚糖的生產工藝逐步代替傳統的化學法，其具有降解效率高、產物較為均一，環境污染小等優點；現在市面上的殼聚糖酶制劑存在純度小，酶活力不高，貯存周期較短的確定，所以人們不斷的研究高效的殼聚糖酶希望改進生產工藝，提高生產效率。

能產生殼聚糖酶的細菌和真菌大都存在產酶量低的缺點，人們希望通過基因突變、工程菌改造等方式定向改變菌株以提高殼聚糖酶的產量，但是通過這兩種手段存在成功率低，周期長等缺點，不利于工業化的生產。

發明內容

本發明的目的是提供了一株高效產殼聚糖酶的鮭亞科腎桿菌菌株QD-01及其發酵方法和應用。本發明從海洋環境中篩選到一株可以高效產殼聚糖酶的菌株QD-01，并對其發酵條件進行了優化，菌株產生的殼聚糖酶具有良好的性質，具有良好的市場應用前景。

為實現上述發明目的，本發明采用以下技術方案予以實現：

本發明提供了一株高效產殼聚糖酶的鮭亞科腎桿菌菌株QD-01，其分類命名為鮭亞科腎桿菌Renibacterium salmoninarum，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保藏編號為：CGMCC No.13655。

本發明提供了利用所述的菌株QD-01產殼聚糖酶的發酵方法，將所述菌株QD-01接種到種子培養基中培養12-16h，培養的溫度為18-28℃；然后將種子培養液接種到發酵培養基中進行培養48-72h，發酵的溫度在24℃-30℃；獲得發酵培養液離心后進行膜過濾，最終獲得高純度的殼聚糖酶。

進一步的：所述發酵所用的碳源為葡萄糖、蔗糖、乳糖和馬鈴薯中的至少一種。

進一步的：所述發酵所用的氮源為蛋白胨、酵母粉、氯化銨、硫酸銨和大豆粉中的至少一種。

進一步的：所述發酵所用的緩沖液組分為K₂HPO₄-KH₂PO₄。

進一步的：所述菌株QD-01產酶的最佳條件是乳糖含量為0.1％、酵母粉含量為0.07％、殼聚糖濃度為0.75％、磷酸二氫鉀0.2％、磷酸氫二鉀0.4％，以質量比計。

本發明提供了所述的菌株QD-01發酵產生的殼聚糖酶。

進一步的：所述殼聚糖酶的適應溫度為35～60℃，pH范圍為4.0～9.0。

本發明還提供了所述的殼聚糖酶在生產殼聚糖中的應用。

具體應用步驟為：將殼聚糖加入到稀酸溶液中，加熱條件下攪拌均勻，加入所述殼聚糖酶溶液進行反應，反應結束后加熱煮沸，冷卻后噴干，獲得殼聚糖。