[發明專利]一種檢測鑒定非典型豬瘟病毒（APPV）的PCR引物及檢測方法與檢測試劑盒在審
| 申請號： | 201710243135.4 | 申請日： | 2017-04-14 |
| 公開（公告）號： | CN106929606A | 公開（公告）日： | 2017-07-07 |
| 發明（設計）人： | 孫媛;馬靜云;藍天;麥凱杰 | 申請（專利權）人： | 華南農業大學 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 廣州粵高專利商標代理有限公司44102 | 代理人： | 林麗明 |
| 地址： | 510642 廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 檢測 鑒定 非典型 豬瘟 病毒 appv pcr 引物 方法 試劑盒 | ||
1.一對檢測鑒定非典型豬瘟病毒的PCR引物，其特征在于，PCR上下游引物APPV-F/R的序列依次如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.2所示。
2.一種利用權利要求1所述PCR引物檢測鑒定非典型豬瘟病毒的方法，其特征在于，包括如下步驟：
S1.提取待測樣品RNA，反轉成cDNA；
S2.以步驟S1所述cDNA為模板，以權利要求1所述引物進行PCR反應；
S3.將擴增產物電泳檢測，根據電泳結果判斷待測樣品中是否含有非典型豬瘟病毒；
根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述PCR的反應體系為：2×Taq Master Mix 10μL，10μmol/L APPV-F 1μL，10μmol/L APPV-R 1μL，cDNA模板2μL，ddH2O 6μL，共20μL。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述PCR反應程序為：94℃預變性5 min；94℃變性30s，49℃退火30s，72℃延伸90s，共33個循環；72℃終延伸10 min。
4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，結果判斷標準為：當PCR產物在1491 bp處有明顯發亮條帶，且陰性對照無同大小條帶，則表明待測樣品中含有非典型豬瘟病毒。
5.權利要求2～5任一所述方法在檢測和/或鑒定非典型豬瘟病毒，或檢測和/或鑒定豬病樣組織中是否含有非典型豬瘟病毒。
6.權利要求2～5任一所述的方法在制備檢測和/或鑒定非典型豬瘟病毒的試劑盒方面的應用。
7.一種檢測鑒定非典型豬瘟病毒的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含權利要求1所述PCR引物。
8.根據權利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包含豬待測樣品RNA提取及反轉錄所需試劑和PCR擴增所需試劑。
9.根據權利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括陰性對照；所述陰性對照為豬流行性腹瀉病毒，豬塞內加谷病毒，口蹄疫病毒，豬德爾塔冠狀病毒，豬庫布病毒，豬博卡病毒或豬薩佩羅病毒中的一種或多種的cDNA。
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