[發明專利]一種基于疏水離子交換固相萃取的煙草或煙草制品中煙草特有N?亞硝胺的提取及測定方法

在審

• 申請號: 201710240352.8
• 申請日: 2017-04-13
• 公開（公告）號: CN106841474A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發明（設計）人: 羅彥波;姜興益;龐永強;朱風鵬;張洪非;胡少東;李翔宇;陳小靜;閆瑞波
• 申請（專利權）人: 國家煙草質量監督檢驗中心
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88;G01N30/86
• 代理公司: 鄭州睿信知識產權代理有限公司41119
• 代理人: 胡云飛

1.一種基于疏水離子交換固相萃取的煙草或煙草制品中煙草特有N-亞硝胺的提取方法，其特征在于：包括以下步驟：

1)將煙草或煙草制品加入濃度為5～100mmol/L的乙酸銨溶液進行提取，得粗提取液；

2)將步驟1)所得的粗提取液流過經活化處理后的HiCapt MCX固相萃取柱，完成上樣；

3)對步驟2)中完成上樣后的HiCapt MCX固相萃取柱進行淋洗；

4)用丙酮、丙酮氨水混合液、丙酮甲酸混合液中的任意一種進行洗脫，即得N-亞硝胺的提取液；所述丙酮氨水混合液中丙酮、質量分數為35％的氨水的體積比為97～99:3～1；丙酮甲酸混合液中丙酮、甲酸的體積比為97～99:3～1。

2.如權利要求1所述的基于疏水離子交換固相萃取的煙草或煙草制品中煙草特有N-亞硝胺的提取方法，其特征在于，所述煙草或煙草制品中煙草特有N-亞硝胺包括NNN、NNK、NAT和NAB。

3.根據權利要求1所述的基于疏水離子交換固相萃取的煙草或煙草制品中煙草特有N-亞硝胺的提取方法，其特征在于：步驟2)中所述活化處理為：依次用丙酮、甲醇水溶液、水流經HiCapt MCX固相萃取柱。

4.根據權利要求1所述的基于疏水離子交換固相萃取的煙草或煙草制品中煙草特有N-亞硝胺的提取方法，其特征在于：步驟3)中用甲醇水溶液對HiCapt MCX固相萃取柱進行淋洗，所述甲醇水溶液中甲醇的體積分數為5～20％。

5.根據權利要求1所述的基于疏水離子交換固相萃取的煙草或煙草制品中煙草特有N-亞硝胺的提取方法，其特征在于：步驟1)中所得粗提取液在上樣前pH調至3.0～11.0。

6.一種基于疏水離子交換固相萃取的煙草或煙草制品中煙草特有N-亞硝胺的測定方法，其特征在于：包括以下步驟：

1.N-亞硝胺提取液的制備

1.1向煙草或煙草制品中依次加入同位素內標和濃度為5～100mmol/L的乙酸銨溶液進行提取，得到混合液；

1.2將步驟1.1所得的混合液流過經活化處理后的HiCapt MCX固相萃取柱，完成上樣；

1.3對步驟1.2中完成上樣后的HiCapt MCX固相萃取柱進行淋洗；

1.4用丙酮、丙酮氨水混合液、丙酮甲酸混合液中的任意一種進行洗脫，即得N-亞硝胺的提取液；

2.N-亞硝胺的測定

將步驟1.4中所得的提取液吹干，再用復溶溶液進行復溶得待測液，然后對待測液進行液相色譜-串聯質譜測定；所述復溶溶液由甲酸銨溶液和甲酸乙腈溶液配制而成。

7.根據權利要求6所述的基于疏水離子交換固相萃取的煙草或煙草制品中煙草特有N-亞硝胺的測定方法，其特征在于：所述復溶溶液由0.01mol/L的甲酸銨溶液與甲酸體積分數為0.1％的甲酸乙腈溶液按照1～2:1～2的體積比配制而成。

8.根據權利要求6所述的基于疏水離子交換固相萃取的煙草或煙草制品中煙草特有N-亞硝胺的測定方法，其特征在于：步驟1.1中所得混合液在上樣前pH調至3.0～11.0。

9.根據權利要求6所述的基于疏水離子交換固相萃取的煙草或煙草制品中煙草特有N-亞硝胺的測定方法，其特征在于：所述液相色譜-串聯質譜分析的條件為：色譜柱：Poroshell 120EC-C18；柱溫：40℃；進樣量：5μL；流動相A為0.01mol/L甲酸銨溶液，流動相B為0.1％甲酸乙腈溶液；流速：0.4mL/min；流動相梯度程序：t＝0min，10％B，t＝2.0min，40％B，t＝4.0min，60％B，t＝6.0min，90％B，t＝9.0min，90％B，t＝9.5min，10％B，t＝15.0min，10％B；質譜條件：電噴霧電壓5000V；霧化氣壓力50psi；輔助霧化氣壓力50psi；氣簾氣壓力35psi；離子源溫度450℃；進口電壓8V；出口電壓10V；去簇電壓40V；駐留時間40ms；監測模式：多反應監測。

10.根據權利要求9所述的基于疏水離子交換固相萃取的煙草或煙草制品中煙草特有N-亞硝胺的測定方法，其特征在于：所述多反應監測中NNN、NNK、NAT和NAB的定量離子對依次為178.1>148.2、208.1>122.1、190.1>160.1和192.1>162.2，相應的碰撞電壓依次為15、16、15和17eV；NNN、NNK、NAT和NAB的定性離子對依次為178.1>120.1、208.1>106.1、190.1>106.1和192.1>133.1，相應的碰撞電壓依次為15、16、15和17eV；NNN-d4、NNK-d4、NAT-d4和NAB-d4的定量離子對依次為182.1>152.2、212.1>126.1、194.1>164.1和196.1>166.2，相應的碰撞電壓依次為15、16、15和17eV。