[發明專利]一種基于疏水離子交換固相萃取的煙草或煙草制品中煙草特有N?亞硝胺的提取及測定方法

在審

• 申請號: 201710240352.8
• 申請日: 2017-04-13
• 公開（公告）號: CN106841474A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發明（設計）人: 羅彥波;姜興益;龐永強;朱風鵬;張洪非;胡少東;李翔宇;陳小靜;閆瑞波
• 申請（專利權）人: 國家煙草質量監督檢驗中心
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88;G01N30/86
• 代理公司: 鄭州睿信知識產權代理有限公司41119
• 代理人: 胡云飛

技術領域

本發明涉及一種基于疏水離子交換固相萃取的煙草或煙草制品中煙草特有N-亞硝胺的提取及測定方法，屬于煙草化學檢驗技術領域。

背景技術

煙草特有N-亞硝胺是胺類化合物在酸性條件下與亞硝化試劑反應而生成的，是一類受到廣泛關注的致癌物質，不僅是霍夫曼清單和美國食品藥品監督管理局“煙草制品及煙氣中有害及潛在有害物質名單”中的重要物質，也是國際癌癥研究機構“無煙氣煙草制品中28種有害物質”名單中的重要成分。因此，準確分析煙草及煙草制品中的煙草特有N-亞硝胺含量，對評價煙草及煙草制品、保障煙草制品消費安全具有重要意義。

最早建立的煙草或煙草制品中煙草特有N-亞硝胺的檢測方法有兩種：第一種方法是樣品經水提取后用二氯甲烷萃取，有機相過氧化鋁固相萃取柱凈化，凈化液濃縮后再經氣相色譜-熱能分析聯用儀分離檢測。但是上述方法均要進行液液萃取、固相萃取凈化、凈化液濃縮等操作，樣品前處理步驟繁瑣，不利于大量樣品的快速分析。此外，熱能分析儀雖是分析煙草特有N-亞硝胺的專屬型檢測器，但其仍存在前處理時間長、效率低等問題。第二種方法是用緩沖鹽溶液提取煙草及煙草制品，將提取液過濾后進行液相色譜-串聯質譜分析。該方法前處理操作簡單，但是樣品溶液進行儀器分析前沒有經過凈化處理，因此存在較強的基質干擾現象，加大了儀器維護頻率。

申請公開號為CN102012407A的發明專利公開了一種煙草特有N-亞硝胺的檢測方法，在該方案中將萃取液流經固相萃取小柱，然后采用甲酸水淋洗，最后用氨水/甲醇洗脫，得到待測液。該方案中的固相萃取填料為N-乙烯基吡咯烷酮-苯磺酸共聚物，有機聚合物填料在有機溶劑中會溶脹，會在一定程度上影響填料的富集和凈化效果。另外，該方案中也沒有對影響萃取效果的各種參數進行優化。

液相色譜-串聯質譜以其強大的色譜分離能力、良好的選擇性和靈敏度，在復雜樣品痕量物質的分析中展現出強大的優勢，在煙草特有N-亞硝胺的分析中有廣泛的應用。

發明內容

本發明的目的是提供一種基于疏水離子交換固相萃取的煙草或煙草制品中煙草特有N-亞硝胺的提取方法。

本發明的另一個目的是提供一種基于疏水離子交換固相萃取的煙草或煙草制品中煙草特有N-亞硝胺的測定方法。

為了實現以上目的，本發明所采用的技術方案是：

一種基于疏水離子交換固相萃取的煙草或煙草制品中煙草特有N-亞硝胺的提取方法，包括以下步驟：

1)將煙草或煙草制品加入濃度為5～100mmol/L的乙酸銨溶液進行提取，得粗提取液；

2)將步驟1)所得的粗提取液流過經活化處理后的HiCapt MCX固相萃取柱，完成上樣；

3)對步驟2)中完成上樣后的HiCapt MCX固相萃取柱進行淋洗；

4)用丙酮、丙酮氨水混合液、丙酮甲酸混合液中的任意一種進行洗脫，即得N-亞硝胺的提取液；所述丙酮氨水混合液中丙酮、氨水的體積比為97～99:3～1；丙酮甲酸混合液中丙酮、甲酸的體積比為97～99:3～1。

上述煙草或煙草制品中煙草特有N-亞硝胺包括NNN、NNK、NAT和NAB。NNN、NNK、NAT和NAB的結構如圖1中所示。

上述步驟1)中提取操作為：將煙草或煙草制品加入濃度為5～100mmol/L的乙酸銨溶液中，進行超聲處理，然后分離不溶物，得粗提取液。

上述每1g煙草或煙草制品所用乙酸銨溶液的用量為10～100mL。

上述超聲處理，超聲功率280～700W，頻率20～40kHz，時間≥10min。超聲時間優選為10～60min。超聲時間進一步優選為30min。

上述分離不溶物采用過濾或離心的方式。

上述過濾采用水相濾膜。

上述水相濾膜的孔徑為0.20～0.50μm。優選為0.22μm或0.45μm。

上述水相濾膜為聚醚砜膜。

上述離心，是將超聲處理后的混合液靜置，然后進行離心，最后取上層清液。

上述靜置時間為3～10min。優選為5min。

上述離心轉速5000～10000rpm，時間為3～10min。離心時間優選為5min。

上述HiCapt MCX固相萃取柱為疏水/離子交換混合保留機理固相萃取柱。

上述HiCapt MCX固相萃取柱購自于維泰克科技(武漢)有限公司。

上述HiCapt MCX固相萃取柱具有疏水和強離子交換作用。