[發明專利]利用超高效液相色譜?串聯質譜法同時檢測水果中3種增甜劑的方法

在審

• 申請號: 201710238269.7
• 申請日: 2017-04-12
• 公開（公告）號: CN106950313A
• 公開（公告）日: 2017-07-14
• 發明（設計）人: 李志霞;聶繼云;閆震;沈友明;李靜;程楊;匡立學;李海飛;毋永龍;關棣鍇;李明強;徐國鋒
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院果樹研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司11002
• 代理人: 王文君

技術領域

本發明涉及一種水果中增甜劑的檢測方法，屬于食品檢測分析技術領域。

背景技術

水果是大自然賜予人類的天然珍品，營養價值極高，富含可溶性糖、有機酸、維生素、礦質元素、膳食纖維等人體生長發育所需營養成分，已成為國人膳食的重要組成部分。可溶性糖和有機酸是決定水果風味的主要物質，大多數水果香甜味美、酸爽可口，深受人們的喜愛。然而，有的水果因品種特性、生長發育過程中光照、施肥或栽培措施等諸多因素的影響，果實中可溶性糖和有機酸的含量及組成比例不同，造成果實風味偏酸或偏淡；可能對其銷售價值產生影響。

“糖精棗”和“甜蜜素柑橘”事件將水果中使用增甜劑變甜的輿論推到風口浪尖，很多消費者開始質疑和盲目相信這些媒體的炒作，造成水果大量積壓和滯銷，對水果產業造成毀滅性的打擊。在水果中使用增甜劑是少數不良商家為了迎合消費者的口味愛好和賺取更大利潤做出的嘗試，實踐證明這種做法使果實快速腐爛變質而得不償失。事實上，現代栽培和育種技術運用到水果生產中，通過適地適栽、品種選育、栽培調控、加強營養等技術措施改善水果品質后，確實可使很多水果風味變甜，而不是通過使用增甜劑。

因此，建立一種高效、快速的檢測水果中增甜劑的方法，是保護我國水果產業健康發展、保障我國水果質量安全有效監管和指導公眾科學消費的重要手段。傳統的增甜劑的檢測方法主要有分光光度法、高效液相色譜法、氣相色譜法、離子色譜法、毛細管電泳法等。超高效液相色譜-串聯質譜法是近年來迅速發展起來的一種檢測技術，已應用于食品安全檢測和研究的很多領域。

超高效液相色譜-串聯質譜檢測方法與上述方法相比，具有分離能力強、定性分析結果可靠、檢出限低、分析時間快、自動化程度高等優點。液質聯用體現了色譜和質譜優勢的互補，將色譜對復雜樣品的高分離能力與質譜具有高選擇性、高靈敏性及能夠提供相對分子質量與結構信息的優點結合起來。

發明內容

為克服現有技術不足，本發明提供利用超高效液相色譜-串聯質譜法同時檢測水果中3種增甜劑的方法，旨在為保障食品安全和質量提供技術支持。

本發明技術方案如下：

一種利用超高效液相色譜-串聯質譜法同時檢測水果中3種增甜劑的方法，包括制備供試樣品和超高效液相色譜-串聯質譜法檢測。

所述3種增甜劑為甜蜜素(SC)、糖精鈉(SA)、紐甜(NTM)。

優選地，制備供試樣品所用提取液為甲醇/水(v∶v＝1/1)、乙腈/水(v∶v＝1/1)或純水，更優選為甲醇/水(v∶v＝1/1)。

進一步優選地，以g/mL計，待測樣品與提取液的比例為(1-2)∶(1-6)，更優選為1∶2。

優選地，制備供試樣品過程中使用聚醚砜濾膜進行過濾，進一步優選地，聚醚砜濾膜的孔徑為0.22μm。

具體地，制備供試樣品的方法包括：將待測樣品勻漿，稱取適量勻漿樣品加入適量甲醇/水(v∶v＝1/1)提取液，充分搖勻，離心，吸取上清液過0.22μm聚醚砜濾膜后，制得供試樣品；待上機檢測。

優選地，色譜條件如下：

色譜柱：HSS T3柱(100mm×2.1mm，1.8μm)；流速0.4mL/min；進樣量5μL。

進一步優選地，流動相為甲醇-水。

電噴霧(ESI)離子源；負離子模式；MRM(多反應監測)；離子源溫度150℃；去溶劑氣溫度400℃；去溶劑氣和錐孔氣均為高純氮氣，流速分別為800L/h和50L/h；碰撞氣(高純氬氣)流速0.14mL/min。

3種增甜劑優化的質譜參數如下表：

注：*為定量離子

Retention time指保留時間，Parent ion指母離子，Daughter ions指子離子，Cone指錐孔電壓，Collision energy指碰撞能量，下同。

本發明方法采用基質匹配-外標法進行定量分析，基質效應主要由基質成分和目標化合物在電噴霧離子源進行離子化時相互競爭造成，包括基質增強效應和基質抑制效應。在液相色譜-質譜的定性定量分析中，基質效應影響儀器的靈敏度和重復性，是影響準確定性及定量的重要因素，因而在建立檢測方法時應考慮基質效應的影響并采取措施進行消除，所以本發明采用基質配標，以抵消基質效應對方法精密度及結果準確度造成的影響。

本發明方法具體包括采用同一來源的空白樣品提取溶劑作為試劑，配制3種增甜劑不同濃度水平的混合標準溶液，以濃度為橫坐標(x，μg/kg)，定量離子對峰面積為縱坐標(y)，進行線性回歸計算。