[發(fā)明專利]一種脫細(xì)胞羊膜粉的制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710237111.8
• 申請(qǐng)日: 2017-04-12
• 公開（公告）號(hào): CN107137768A
• 公開（公告）日: 2017-09-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉洪;楊熙
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州諾普再生醫(yī)學(xué)有限公司
• 主分類號(hào): A61L27/36
• 分類號(hào): A61L27/36;A61L26/00;A61K35/50;A61K8/98;A61P17/02;A61Q19/00
• 代理公司: 北京聯(lián)瑞聯(lián)豐知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11411
• 代理人: 劉剛

本發(fā)明公開了一種脫細(xì)胞羊膜粉的制備方法，包括1)、將羊膜清洗、剪碎；2)、在4℃的振蕩器中洗滌12～24小時(shí)；3)、在4℃的振蕩器中用1％的Triton x?100和氫氧化銨洗滌1～3天；4)、在4℃的振蕩器中用去離子水洗滌12～24小時(shí)；然后用PBS洗滌12～24小時(shí)；5)、?80℃保存24小時(shí)，然后凍干；6)、低溫環(huán)境下研磨成粉7)、消毒后?80℃儲(chǔ)存。本發(fā)明采用相對(duì)溫和的脫細(xì)胞方法去除了羊膜的細(xì)胞并進(jìn)行滅菌處理，整個(gè)過程中嚴(yán)格控制低溫環(huán)境，對(duì)羊膜中的活性物質(zhì)進(jìn)行有效的保護(hù)；所制得的冷凍羊膜粉末可以制成羊膜膠或噴霧等多種形式，更有利于創(chuàng)面利用膠原與蛋白小分子，為創(chuàng)面愈合提供更有效的營(yíng)養(yǎng)支持，其生長(zhǎng)因子等活性物質(zhì)可持續(xù)促上皮化。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種脫細(xì)胞羊膜粉的制備方法。

背景技術(shù)

羊膜是胎盤的最內(nèi)層，包裹著羊水的光滑的、無血管、神經(jīng)及淋巴、具有彈性一層生物半透膜；羊膜中存在Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ型膠原和纖維粘連蛋白、層粘連蛋白等多種蛋白成分及一些生長(zhǎng)因子，如表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(EGF)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)等，這些生長(zhǎng)因子能促進(jìn)上皮細(xì)胞的增殖、遷移、分化，增強(qiáng)上皮細(xì)胞的粘附性，促上皮化，減輕瘢痕；

羊膜可促進(jìn)結(jié)膜干細(xì)胞分化為結(jié)膜上皮細(xì)胞、促進(jìn)結(jié)膜上皮向角膜上皮轉(zhuǎn)化，促進(jìn)角膜緣干細(xì)胞增殖及提供一個(gè)有助于其生長(zhǎng)的微環(huán)境，促進(jìn)角膜上皮細(xì)胞移行、促進(jìn)角膜基質(zhì)膠原纖維增生、抑制結(jié)膜下纖維組織增生、抑制新生血管增生，具有抗炎、抗菌等功能；羊膜上皮細(xì)胞不表達(dá)hla-a、b、c、dr抗原或β2微球蛋白，表達(dá)ib抗原、限制ia抗原，這些特點(diǎn)使羊膜表達(dá)低抗原性；羊膜中含有多種膠原及蛋白成分，可以為創(chuàng)面愈合提供豐富的營(yíng)養(yǎng)支持；

羊膜的生物學(xué)特性和醫(yī)學(xué)研究均證明羊膜作為敷料應(yīng)用于創(chuàng)面時(shí)相比其他很多人工合成敷料具有明顯的優(yōu)勢(shì)；人羊膜上皮細(xì)胞不表達(dá)hla-a、b、c、dr抗原或β2微球蛋白，表達(dá)ib抗原、限制ia抗原，這些特點(diǎn)使羊膜表達(dá)低抗原性；羊膜的結(jié)構(gòu)與羊膜中的膠原和多種活性物質(zhì)不僅可以使羊膜發(fā)揮較好的屏障作用，而且還具有抗菌消炎、促愈合、減輕攣縮等作用；羊膜內(nèi)的膠原、蛋白成分和活性因子，在作為敷料應(yīng)用于傷口時(shí)營(yíng)養(yǎng)成份的利用和活性因子的釋放率可以加快創(chuàng)面愈合速度和提高創(chuàng)面愈合質(zhì)量。但新鮮生物羊膜為單層結(jié)構(gòu)，厚度薄，易卷曲折疊，滑動(dòng)脫落，有效作用時(shí)間短，在應(yīng)用創(chuàng)面時(shí)會(huì)有一定局限性；人們對(duì)新鮮羊膜做處理使其在保留天然優(yōu)良性能的同時(shí)改良缺陷和不同，使其具有更大價(jià)值。

專利CN103114073B公布了一種人羊膜的脫細(xì)胞方法，采用表面活性劑TritonX-100、胰脂酶、DNA酶結(jié)合作用，屬于化學(xué)與生物方法相結(jié)合的較徹底的脫細(xì)胞方法，但這類方法形成會(huì)導(dǎo)致蛋白成分和生長(zhǎng)因子的大量流失，可做為較理想的組織工程的支架材料，但作為敷料應(yīng)用于創(chuàng)面時(shí)的作用會(huì)大大下降；

專利CN200510046856.3公開了一種干燥活性羊膜的制備方法，可以將新鮮羊膜脫細(xì)胞后冷凍干燥，有延長(zhǎng)了羊膜的保質(zhì)期，隨取隨用的優(yōu)點(diǎn)，但仍然是單層結(jié)構(gòu)，厚度薄，質(zhì)感脆，在不規(guī)則創(chuàng)面的應(yīng)用上的適應(yīng)性差。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有的羊膜的脫細(xì)胞方法不夠溫和，同時(shí)具有抗原性和其他來源于供體的風(fēng)險(xiǎn)的缺陷，提供一種能適應(yīng)不同創(chuàng)面的脫細(xì)胞羊膜粉的制備方法。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案：

1、一種脫細(xì)胞羊膜粉的制備方法,其特征在于，包括以下步驟：

1)、將新鮮的羊膜清洗，去除表面血跡，剪成碎片；新鮮的羊膜清洗時(shí)使用無菌水、無菌鹽水或培養(yǎng)基；可將羊膜剪成面積為5×5cm的碎片，可以用無菌剪刀和鑷子，手術(shù)刀或切片機(jī)，也可以按用途更改尺寸；新鮮的羊膜取自新鮮的胎盤，可以是人源，也可以是動(dòng)物源；

2)、在4℃的振蕩器中用去離子水洗滌12～24小時(shí),每4～6小時(shí)更換一次去離子水；