[發明專利]一種脫細胞羊膜粉的制備方法

在審

• 申請號: 201710237111.8
• 申請日: 2017-04-12
• 公開（公告）號: CN107137768A
• 公開（公告）日: 2017-09-08
• 發明（設計）人: 劉洪;楊熙
• 申請（專利權）人: 蘇州諾普再生醫學有限公司
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L26/00;A61K35/50;A61K8/98;A61P17/02;A61Q19/00
• 代理公司: 北京聯瑞聯豐知識產權代理事務所(普通合伙)11411
• 代理人: 劉剛

1.一種脫細胞羊膜粉的制備方法,其特征在于，包括以下步驟：

1)、將新鮮的羊膜清洗，去除表面血跡，剪成碎片；

2)、在4℃的振蕩器中用去離子水洗滌12～24小時,每4～6小時更換一次去離子水；

3)、在4℃的振蕩器中用質量分數為0.1～2％的Triton X-100和氫氧化銨混合液洗滌1～3天，每天更換洗滌液；或用器具輕刮羊膜表面后震蕩細胞；

4)、在4℃的振蕩器中用去離子水洗滌12～24小時,每4～6小時更換一次去離子水；然后用PBS洗滌12～24小時，每4～6小時更換PBS；

5)、-80℃保存24小時后凍干，將泥漿狀支架置于一次性無菌平皿中，注意無菌操作，轉移至凍干機冷阱中預冷，開啟真空，按照預設的凍干工藝凍干，無菌收料；

6)、將凍干后的羊膜碎片放入鋼桶中浸入液氮中預冷后，鋼桶放入冷凍研磨機中研磨成粉；

7)、將羊膜粉輻照滅菌后-80℃儲存備用；

步驟2)-4)中溫度保持在4℃，振蕩器的轉數為120～150rpm；將步驟5)所得的無菌脫細胞凍干羊膜碎片放入液氮中預冷2min后在冷凍研磨機中，研磨頻率為40～80Hz，研磨時間為20～60s，形成粒徑250μ m的羊膜粉。

2.如權利要求1所述的脫細胞羊膜粉的制備方法，其特征在于，所述步驟7)中采用15～30KGy的γ射線或電子束輻照滅菌。

3.如權利要求1所述的脫細胞羊膜粉的制備方法,其特征在于，步驟5)中將冷凍后的羊膜碎片放入凍干機冷阱中預冷2-5小時，開啟真空凍干24～48小時。

4.如權利要求1所述的脫細胞羊膜粉的制備方法,其特征在于，步驟5)-7)中嚴格控制不高于4℃的低溫環境，凍干、研磨工藝過程中控制低溫環境以保護羊膜中的活性因子。

5.如權利要求1所述的脫細胞羊膜粉的制備方法,其特征在于，以步驟7)中的脫細胞羊膜粉末為中間產品，消化后制成可溶羊膜、進一步交聯后制成羊膜膠、噴霧、藥膏添加到輔料、藥物中應用。

6.如權利要求1所述的脫細胞羊膜粉的制備方法,其特征在于，以步驟7)中的脫細胞羊膜粉末與生物大分子聚合物及合成聚合物交聯應用于組織工程領域。