[發(fā)明專利]一種A群奈瑟氏腦膜炎球菌的非動(dòng)物源培養(yǎng)基及其培養(yǎng)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710236672.6
• 申請(qǐng)日: 2017-04-12
• 公開（公告）號(hào): CN108690816A
• 公開（公告）日: 2018-10-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王斌;夏永;王公孝;熊慧玲;何伯強(qiáng);許蓉華;劉璐
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 成都生物制品研究所有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12R1/36
• 代理公司: 成都高遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

本發(fā)明公開了一種A群奈瑟氏腦膜炎球菌的非動(dòng)物源培養(yǎng)基，它包括液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基，其中，液體培養(yǎng)基成分：非動(dòng)物源有機(jī)氮源8～30g/L、氯化鉀0.2～0.8g/L、味精1～2g/L、氯化銨1.5～3g/L、磷酸氫二鈉0.5～0.8g/L、磷酸二氫鈉0.15～0.3g/L、胱氨酸0.01～0.03g/L、硫酸鎂0.3～0.5g/L、葡萄糖6～8g/L；固體培養(yǎng)基在前述液體培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加10～20g/L的瓊脂。本發(fā)明還公開了前述培養(yǎng)基的制備方法和用途。本發(fā)明培養(yǎng)基可以高效培養(yǎng)A群奈瑟氏腦膜炎球菌，獲得的多糖含量高，并且培養(yǎng)基為非動(dòng)物源培養(yǎng)基，安全性好，應(yīng)用前景優(yōu)良。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種A群奈瑟氏腦膜炎球菌的非動(dòng)物源培養(yǎng)基及其培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

腦膜炎球菌性腦膜炎(meningococcal meningitis)又稱流行性腦脊髓膜炎(Neisseria meningitides，NM)，簡(jiǎn)稱流腦，是由奈瑟氏腦膜炎球菌引起的一種嚴(yán)重危害人類健康的呼吸道傳染病。易感人群主要為嬰幼兒，以暴發(fā)型病死率最高，可達(dá)40％－60％。根據(jù)莢膜多糖在化學(xué)和血清學(xué)上的不同，腦膜炎球菌分為若干群，其中A、C、Y、W135群是常見的致病菌。腦膜炎球菌除了引起細(xì)菌性腦膜炎外還可引起敗血癥，是一類危害性極大的致病菌。腦膜炎球菌莢膜多糖是其致病的主要毒力因子，因其具有較強(qiáng)的抗原性，已被作為保護(hù)性抗原用于流腦疫苗的制備和生產(chǎn)。在當(dāng)今世界兒童傳染病的防治目標(biāo)中，流腦的免疫預(yù)防仍然是重要課題之一。

我國(guó)于1980年正式生產(chǎn)A群NM多糖疫苗，推廣應(yīng)用以來(lái)，獲得滿意的免疫效果。但現(xiàn)有的A群NM疫苗生產(chǎn)工藝中，采用了動(dòng)物源性的發(fā)酵原料；由于動(dòng)物源原材料可能帶有朊病毒等致病因子的潛在風(fēng)險(xiǎn)，國(guó)際生物制品行業(yè)發(fā)展的趨勢(shì)要求盡量避免使用動(dòng)物源性原材料，有效降低生物制品風(fēng)險(xiǎn)。

流腦A群疫苗生產(chǎn)廠家一般采用將A群奈瑟氏腦膜炎球菌種開啟到10％羊血巧克力瓊脂培養(yǎng)基(含羊血成分)，再傳到改良半綜合培養(yǎng)基(含牛源酸水解酪蛋白)，最后接種到改良半綜合液體培養(yǎng)基(含牛源酸水解酪蛋白)，這些在培養(yǎng)基中接入的動(dòng)物血液成分和動(dòng)物來(lái)源的氮源成分均存在潛在的感染動(dòng)物攜帶病毒的風(fēng)險(xiǎn)，而且成分復(fù)雜，給疫苗帶來(lái)不安全的風(fēng)險(xiǎn)。據(jù)現(xiàn)場(chǎng)觀察資料，疫苗接種后的全身中強(qiáng)反應(yīng)率為3.3％；局部中強(qiáng)反應(yīng)率約為6％。

因此，需要對(duì)現(xiàn)有的A群奈瑟氏腦膜炎球菌的培養(yǎng)基進(jìn)行改進(jìn)，提供一種能夠高效培養(yǎng)A群奈瑟氏腦膜炎球菌的無(wú)動(dòng)物源性原料的培養(yǎng)基。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種無(wú)動(dòng)物來(lái)源成分的A群奈瑟氏腦膜炎球菌培養(yǎng)基及其制備方法和應(yīng)用。

本發(fā)明A群奈瑟氏腦膜炎球菌的非動(dòng)物源培養(yǎng)基，它包括液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基，其中，液體培養(yǎng)基為每1000ml培養(yǎng)基含有如下成分：非動(dòng)物源有機(jī)氮源8～30g、氯化鉀0.2～0.8g、味精1～2g、氯化銨1.5～3g、磷酸氫二鈉0.5～0.8g、磷酸二氫鈉0.15～0.3g、胱氨酸0.01～0.03g、硫酸鎂0.3～0.5g、葡萄糖6～8g，其余為水；

固體培養(yǎng)基每1000ml培養(yǎng)基含有如下成分：非動(dòng)物源有機(jī)氮源8～30g、氯化鉀0.2～0.8g、味精1～2g、氯化銨1.5～3g、磷酸氫二鈉0.5～0.8g、磷酸二氫鈉0.15～0.3g、胱氨酸0.01～0.03g、硫酸鎂0.3～0.5g、葡萄糖6～8g，瓊脂10～20g，其余為水。

其中，所述非動(dòng)物源有機(jī)氮源為酵母粉、大豆蛋白胨、豌豆蛋白胨、大米蛋白胨的一種或多種的組合。

優(yōu)選地，所述非動(dòng)物源有機(jī)氮源為酵母粉或者大豆蛋白胨。

優(yōu)選地，所述非動(dòng)物源有機(jī)氮源為酵母粉和大豆蛋白胨的混合物，二者的重量比例為1:1；或者，所述非動(dòng)物源有機(jī)氮源為酵母粉和大米蛋白胨的混合物，二者的重量比例為1:1。