[發明專利]一種A群奈瑟氏腦膜炎球菌的非動物源培養基及其培養方法

在審

• 申請號: 201710236672.6
• 申請日: 2017-04-12
• 公開（公告）號: CN108690816A
• 公開（公告）日: 2018-10-23
• 發明（設計）人: 王斌;夏永;王公孝;熊慧玲;何伯強;許蓉華;劉璐
• 申請（專利權）人: 成都生物制品研究所有限責任公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/36
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

1.一種A群奈瑟氏腦膜炎球菌的非動物源培養基，其特征在于：它包括液體培養基和固體培養基，其中，液體培養基為每1000ml培養基含有如下成分：非動物源有機氮源8～30g、氯化鉀0.2～0.8g、味精1～2g、氯化銨1.5～3g、磷酸氫二鈉0.5～0.8g、磷酸二氫鈉0.15～0.3g、胱氨酸0.01～0.03g、硫酸鎂0.3～0.5g、葡萄糖6～8g，其余為水；

固體培養基每1000ml培養基含有如下成分：非動物源有機氮源8～30g、氯化鉀0.2～0.8g、味精1～2g、氯化銨1.5～3g、磷酸氫二鈉0.5～0.8g、磷酸二氫鈉0.15～0.3g、胱氨酸0.01～0.03g、硫酸鎂0.3～0.5g、葡萄糖6～8g，瓊脂10～20g，其余為水。

2.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于：所述非動物源有機氮源為酵母粉、大豆蛋白胨、豌豆蛋白胨、大米蛋白胨的一種或多種的組合。

3.根據權利要求2所述的培養基，其特征在于：所述非動物源有機氮源為酵母粉或者大豆蛋白胨。

4.根據權利要求3所述的培養基，其特征在于：所述非動物源有機氮源為酵母粉和大豆蛋白胨的混合物，二者的重量比例為1:1；或者，所述非動物源有機氮源為酵母粉和大米蛋白胨的混合物，二者的重量比例為1:1。

5.一種制備權利要求1～4任意一項所述培養基的制備方法，其特征在于：所述液體培養基按照如下步驟制備：按重量配比稱取原料，混勻，即可；所述液體培養基按照如下步驟制備：按重量配比稱取原料，混合，加熱溶解，凝固，即可。

6.權利要求1所述培養基在A群奈瑟氏腦膜炎球菌的培養中的用途。

7.一種A群奈瑟氏腦膜炎球菌的培養方法，其特征在于：它是采用權利要求1～4任意一項所述培養基進行培養。

8.根據權利要求7所述的培養方法，其特征在于：步驟如下：

(1)菌種開啟：啟開A群奈瑟氏腦膜炎球菌工作種子批菌種，接種于固體培養基，35℃～37℃5％CO₂培養18～24小時，得一代種子；

(2)傳二代培養：將一代種子接種于固體培養基，35℃～37℃培養18～24小時，得二代種子；

(3)傳三代培養：將二代種子接種于搖瓶的液體培養基中，起始OD₅₅₀值為0.1～0.4，35℃～37℃培養3～8小時，得三代菌種菌液；

(4)傳四代培養：將三代菌種菌液接種于發酵罐的液體培養基中，培養溫度35℃～37℃，pH值為7.0～7.2，培養時間3～8小時，OD₅₅₀值達到1.0以上時轉種，得四代菌種菌液；

(5)發酵罐培養：將四代菌種菌液接種于發酵罐的液體培養基中，培養溫度35℃～37℃，pH值為7.0～7.2，在發酵4小時后、OD550達到2.5以上、葡萄糖濃度低于20mmol/L時開始補加20％葡萄糖溶液，并控制發酵液中葡萄糖濃度為18～30mmol/L，在補加20％葡萄糖溶液的同時補加等體積的非動物源有機氮源溶液；培養為時間6～10小時；所述非動物源有機氮源溶液每1000ml培養基含有非動物源有機氮源20g，其余為水。

9.根據權利要求8所述的培養方法，其特征在于：步驟(5)中，所述非動物源有機氮源為酵母粉、大豆蛋白胨、豌豆蛋白胨、大米蛋白胨的一種或多種的組合。