[發明專利]一種環肽化合物及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201710235924.3
• 申請日: 2017-04-12
• 公開（公告）號: CN107141335B
• 公開（公告）日: 2020-10-20
• 發明（設計）人: 孫晴鎂;丁立建;何山;姚佳曉;斯拉瓦·愛潑斯坦
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: C07K5/12
• 分類號: C07K5/12;C12P21/04;A61K38/07;A61K38/12;A61P3/04;A61P3/10;C12R1/645
• 代理公司: 寧波奧圣專利代理事務所(普通合伙) 33226
• 代理人: 何仲

本發明公開了一種環肽化合物及其制備方法和應用，特點是該環肽化合物的結構式如Ⅰ所示，其制備方法步驟包括通過海洋球孢枝孢菌（Cladosporium sphaerospermum）發酵培養，然后將發酵產物用乙酸乙酯萃取獲得粗浸膏，將該粗浸膏經減壓硅膠柱層析、Sephadex LH?20凝膠柱層析和反相制備高效液相色譜分離純化得到一種環肽化合物，該環肽化合物具有α?葡萄糖苷酶抑制作用，優點是該化合物與各種藥物可接受的載體、賦形劑或輔料配伍，可以作為治療糖尿病、肥胖癥的藥物先導化合物，其制備方法具有成本低，繁殖周期短，提純工藝簡單。

技術領域

本發明涉及生物醫藥領域，尤其一種環肽化合物及其制備和應用。

背景技術

糖尿病已成為繼心血管疾病和腫瘤之后的第三大威脅人類健康的疾病。Ⅱ型糖尿病是因為靶細胞對胰島素的敏感性降低所致，導致餐后血糖水平高。α-葡萄糖苷酶抑制劑是目前臨床治療Ⅱ型糖尿病的一線口服降糖藥物(如阿卡波糖、伏格列波糖、米格列醇)，它通過可逆性地抑制腸系膜刷狀緣的α-糖苷酶，延緩α-糖苷酶將多糖分解為葡萄糖，從而減慢葡萄糖的吸收速度，從而降低餐后血糖。

海洋天然產物作為藥物開發的重要來源，從中尋找新型α-葡萄糖苷酶抑制劑對發現高效低毒的治療II型糖尿病藥物具有重要意義。近幾年來，從海洋天然產物中尋找α-葡萄糖苷酶抑制劑的研究越來越得到學者們的到重視，目前已經發現了45個海洋來源的天然α-葡萄糖苷酶抑制劑。為了尋找α-葡萄糖苷酶抑制劑，本發明人研究得知，海洋球孢枝孢菌Cladosporium sphaerospermum YS3-1-5的發酵產物的粗提物具有較好的α-葡萄糖苷酶抑制活性，遂對其活性成分進行了研究。研究發現所示環肽化合物具有α-葡萄糖苷酶抑制活性，目前尚未見該化合物的化學結構及作為α-葡萄糖苷酶抑制劑的報道，因此市場上也尚未見有與此相關的藥物。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種環肽類的α-葡萄糖苷酶抑制劑及其制備方法和應用。

本發明解決上述技術問題所采用的技術方案為：

一種環肽化合物，含有1個亮氨酸殘基、2個N甲基亮氨酸殘基和一個苯丙氨酸殘基構成的環四肽化合物，其結構式如(I)所示：

上述環肽化合物的制備方法，具體包括如下步驟：

(1)發酵生產和浸膏的獲取

將保藏編號為CCTCC NO：M2014098的球孢枝孢菌YS3-1-5(Cladosporiumsphaerospermum YS3-1-5)菌落接種到裝有液體培養基的錐形瓶中，于28℃、180r/min搖床培養10天，獲得發酵液，發酵液用乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液減壓濃縮蒸干，獲得粗浸膏；

(2)分離精制

將上述粗浸膏用二氯甲烷和甲醇混合溶劑溶解后，加粗浸膏2倍體積的200-300目硅膠拌樣，通過減壓硅膠柱層析，以石油醚/乙酸乙酯為溶劑進行梯度洗脫，將獲得的洗脫物再經Sephadex LH-20凝膠柱層析以二氯甲烷和甲醇混合溶劑為洗脫劑進行洗脫，所得洗脫液再經反相制備HPLC分離純化，以甲醇/水(v/v 90∶10)為流動相進行分離純化得到環肽化合物(10mg)，其結構如式(I)所示：

步驟(1)所述的液體培養基配制方法如下：將甘露醇10.0g，酵母膏3.0g，麥芽糖20.0g，味精10.0g，葡萄糖20.0g，KH₂PO₄ 0.5g和MgSO₄ 0.3g，溶于1L海水中，于121℃高壓滅菌20min即可。

步驟(2)所述的二氯甲烷和甲醇混合溶劑中二氯甲烷與甲醇的體積比為1∶1。