[發明專利]一種茶葉鮮樣中茶氨酸含量的快速分析方法

有效

• 申請號: 201710234515.1
• 申請日: 2017-04-11
• 公開（公告）號: CN107202836B
• 公開（公告）日: 2020-03-06
• 發明（設計）人: 張麗
• 申請（專利權）人: 蘇州市職業大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N21/64
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 馬明渡;楊超

一種茶葉鮮樣中茶氨酸含量的快速分析方法，其特征在于：將茶葉鮮樣攪碎混勻，以超純水作為萃取溶劑，在90℃條件下浸提20min，離心過濾后，以6?氨基喹啉?N?羥基琥珀酰亞胺基氨基甲酸酯為衍生劑柱前衍生化，使用XBridge C18色譜柱梯度洗脫，用高效液相色譜?熒光檢測器分離檢測。該方法樣品制備快速簡單、成本低，精密度、準確度、穩定性以及線性關系良好，整個分析過程快速、靈敏且重現性好，適用于茶葉鮮樣中茶氨酸的快速分析。

技術領域

本發明涉及分析化學領域，具體涉及一種茶葉鮮樣中茶氨酸含量的快速分析方法。

背景技術

茶是世界三大天然飲料之一，具有獨特的香氣、豐富的營養和保健功效，深受消費者喜愛。茶葉中含有豐富的氨基酸，它們是構成茶葉滋味的重要成分，直接影響茶葉的品質。其中，茶氨酸是茶葉中特有的一種氨基酸，占茶葉氨基酸總量的 50%以上。茶氨酸安全無毒，具有降血壓、抗疲勞、抗腫瘤等多種生物學功能，隨著茶氨酸生理功能和醫藥價值的發現，茶氨酸在醫療、保健、食品、飲料和精細化工等領域被廣泛利用。茶氨酸的準確定量分析，對于茶葉品質的評價、茶氨酸的應用研究開發及其功能代謝等方面的研究具有十分重要的意義。

目前對茶葉中茶氨酸分析方法的研究中以干樣較多和較為成熟，如國標GB/T8303-2013中規定，茶樣需磨碎后在電熱恒溫干燥箱中加熱、除去水分至恒重后再用于氨基酸含量的測定。由于干樣通常經高溫殺青、烘干和粉碎而成，高溫過程中蛋白質變性，其蛋白酶的生物活性喪失，易造成蛋白質降解導致氨基酸含量增加，同時烘干等步驟可能會引起茶葉各種生化成分的轉化，使得測定的數據并不能反應茶葉中氨基酸的真實水平，從而產生檢測誤差。

茶葉中茶氨酸的分析方法主要有茚三酮比色法、氣相色譜及其質譜聯用法、毛細管電泳法、高效液相色譜法等。經典的分析方法一般采用氨基酸分析儀，使用茚三酮作為衍生試劑柱后衍生測定。但氨基酸分析儀價格昂貴，分析時間長，專屬性強，只能用于分析茶氨酸等游離氨基酸，限制了其廣泛應用。相對于其他幾種方法，柱前衍生-高效液相色譜法無需特殊反應裝置，具有儀器普及率高、分析時間短、方法靈活多樣、靈敏度高、易于推廣的優點，逐漸成為茶氨酸檢測的常規手段。中國發明專利“利用反相高效液相色譜檢測茶葉中游離氨基酸的方法”（專利號ZL201510109474.4）以6-氨基喹啉-N-羥基琥珀酰亞胺基氨基甲酸酯為柱前衍生劑，使用氨基酸專用分析柱進行梯度洗脫，結合反相高效液相色譜，實現了對茶葉中茶氨酸等19種氨基酸的定量分析。但該發明采用氨基酸分離專用色譜柱，需要進行復雜的梯度分離，使用成本高，運行周期長（1h左右），在大量樣品分析過程中，十分的費時，不利于茶氨酸的快速分析和推廣普及。更重要的是，該發明沒有對方法的準確性、靈敏性、精密性等進行必要的方法學驗，技術效果無法得到有效保障。

發明內容

本發明提供一種茶葉鮮樣中茶氨酸含量的快速分析方法，其目的在于解決現有的茶葉茶氨酸分析方法中存在的速度慢、效率低、成本高、基礎應用推廣難等問題。

為達到上述目的，本發明采用的技術方案是：一種茶葉鮮樣中茶氨酸含量的快速分析方法，包括以下兩部分：

第一部分，配制溶液，再用高效液相色譜-熒光檢測法建立已知梯度濃度的被測的茶氨酸的標準曲線；所述標準曲線的建立由以下步驟組成：

步驟（1），準備茶氨酸標準品，再分別配制0.14 mol/L的醋酸鹽緩沖液、0.4mol/L的硼酸鹽緩沖液、1mg/mL的AQC衍生液、6種濃度的茶氨酸標準工作溶液，茶氨酸標準工作溶液的濃度分別為1μmol/L、5μmol/L、50μmol/L、500μmol/L、1000μmol/L、1250μmol/L；

步驟（2），對所述茶氨酸標準工作溶液進行衍生化反應；