[發明專利]一種茶葉鮮樣中茶氨酸含量的快速分析方法

有效

• 申請號: 201710234515.1
• 申請日: 2017-04-11
• 公開（公告）號: CN107202836B
• 公開（公告）日: 2020-03-06
• 發明（設計）人: 張麗
• 申請（專利權）人: 蘇州市職業大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N21/64
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 馬明渡;楊超

1.一種茶葉鮮樣中茶氨酸含量的快速分析方法，其特征在于：所述快速分析方法包括以下兩部分：

第一部分，配制溶液，再用高效液相色譜-熒光檢測法建立已知梯度濃度的被測的茶氨酸的標準曲線；所述標準曲線的建立由以下步驟組成：

步驟（1），準備茶氨酸標準品，再分別配制0.14 mol/L的醋酸鹽緩沖液、0.4mol/L的硼酸鹽緩沖液、1mg/mL的AQC衍生液、6種濃度的茶氨酸標準工作溶液，茶氨酸標準工作溶液的濃度分別為1μmol/L、5μmol/L、50μmol/L、500μmol/L、1000μmol/L、1250μmol/L；0.14 mol/L的醋酸鹽緩沖液的配制方法為：稱取19.0g三水醋酸鈉、1.72g三乙胺溶于1000mL水，用磷酸調節pH至5.05，加EDTA，用0.45μm濾膜過濾；

步驟（2），對所述茶氨酸標準工作溶液進行衍生化反應；

移取6種濃度的所述茶氨酸標準工作溶液，每種濃度的茶氨酸標準工作溶液均取10μL，置于自動進樣瓶中，分別加入70μL所述硼酸鹽緩沖液，渦旋混合；分別取15μL所述AQC衍生液和5μL乙腈，在渦旋狀態下加入自動進樣瓶中，渦旋混合，靜置后在50~55℃下加熱8~15min，取出冷卻至室溫，供分析用；

步驟（3），用高效液相色譜-熒光檢測法測定衍生化的所述茶氨酸標準工作溶液中茶氨酸的色譜峰保留時間和色譜峰面積，以色譜峰保留時間定性，然后以所述茶氨酸標準工作溶液的摩爾濃度為橫坐標，以色譜峰面積為縱坐標繪制出所述標準曲線；

其中，儀器分離條件為：

色譜柱：XBridge C18色譜柱，規格為3.9mm×15cm，4μm；柱溫37℃；流速2.0mL/min；

熒光檢測：激發波長250nm，發射波長395nm；

流動相：A為醋酸鹽緩沖液，按l:10的體積比用超純水稀釋；B為100%乙腈；C為100%超純水；梯度洗脫程序：0min，100%A；0.5min，98%A+2.0B%；0.5-9.0min，96.5%A+3.5%B；9.0-9.5min，95.0%A+5.0%B；9.5-11.5min，91.5%A+ 8.5%B； 11.5-13.0min，83.0%A+17.0%B，保持4min；17.0min，60.0%B+40%C，保持2min；19-23min，100%A；進樣量10μL；

第二部分，測定茶葉鮮樣中所述第一部分中的茶氨酸含量，包括以下步驟：

步驟（1），樣品制備；

取茶葉鮮樣攪碎并混合均勻，向茶葉鮮樣中加入沸水，所述茶葉鮮樣與所述沸水的投入比為向每1g茶葉鮮樣中投入40mL沸水，在88~92℃條件下浸提18~22min，冷卻至室溫后，2500~3500r/min離心4~6min，上清液加水定容10mL，過0.45μm微孔濾膜后得到茶鮮葉樣品溶液；

步驟（2），對所述茶鮮葉樣品溶液進行衍生化反應；

移取10μL茶鮮葉樣品溶液，置于自動進樣瓶中，加入70μL所述硼酸鹽緩沖液，渦旋混合；分別取15μL所述AQC衍生液和5μL乙腈，在渦旋狀態下加入自動進樣瓶中，渦旋混合，靜置后在50~55℃下加熱8~15min，取出冷卻至室溫，供分析用；

步驟（3），根據所述茶氨酸標準工作溶液中茶氨酸的色譜峰保留時間對所述茶鮮葉樣品溶液中茶氨酸定性，使用外標曲線法計算茶鮮葉樣品溶液中茶氨酸的含量；其中，測定茶鮮葉樣品溶液中茶氨酸的儀器分離條件與所述第一部分的步驟（3）中的儀器分離條件相同。

2.根據權利要求1所述的一種茶葉鮮樣中茶氨酸含量的快速分析方法，其特征在于：在所述第一部分的步驟（1）中， 0.4mol/L的硼酸鹽緩沖液的配制方法為：稱取12.36g硼酸，加400mL水溶解，用400g/L氫氧化鈉溶液調節pH至8.8，然后加水稀釋至500mL；

1mg/mL的AQC衍生液的配制方法為：向1mgAQC粉末中加入1mL乙腈，渦旋混合，在55℃條件下加熱至溶解。