[發明專利]一種高效擴增NK細胞的方法

有效

• 申請號: 201710234419.7
• 申請日: 2017-04-11
• 公開（公告）號: CN108690829B
• 公開（公告）日: 2021-12-17
• 發明（設計）人: 李晨蔚;周春燕
• 申請（專利權）人: 上海尚泰生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 徐迅;崔佳佳

1.一種NK細胞的培養方法，其特征在于，所述方法首先使用CS1單抗，氫化可的松及環孢素A對NK細胞進行活化，并且活化后再進行擴增培養，所述的方法包括以下幾個步驟：

(1)抗體包被

用PBS稀釋CS1單抗，并用稀釋好的CS1單抗包被T75培養瓶，抗體包被濃度為35μg/mL，然后置于4℃孵育過夜或者37℃培養箱中孵育2h；

所述CS1單抗為商品化的人源化的單克隆抗體Elotuzumab；

(2)PBMC分離及自體血清制備

使用Ficoll分離人血中的PBMC，并使用X-VIVO培養基將PBMC的濃度調整至約1×10⁶個/mL；同時將分離得到的血漿于56℃進行滅活30min；然后離心后取上清并于4℃儲存備用；

(3)NK細胞活化培養

將步驟(2)中分離后的PBMC細胞轉移至步驟(1)中抗體包被的并用PBS清洗過的培養瓶中；然后加入IL-2、氫化可的松及環孢素A，它們的終濃度分別為1000IU/mL、10^-4μM/L及80ng/mL；最后加入7-10％的自體血清；

(4)NK細胞的擴增培養

觀察細胞狀態，當觀察到細胞的克隆團較多且較大時，將其轉入新的培養瓶中，并補加已經添加IL-2及IL-15的X-VIVO培養基，IL-2及IL-15的終濃度分別為1500IU/mL和15ng/mL；隨后進行隔天補液；使細胞濃度維持在1×10⁶個/mL；在培養第14天后，進行細胞收集，所收集的細胞即為NK細胞，

所述步驟(4)中的克隆團較大是指在10X的顯微鏡下觀察細胞團的直徑大約1cm。

2.根據權利要求1所述的培養方法，其特征在于：所述步驟(2)中人血為人的臍血或外周血。

3.根據權利要求1所述的培養方法，其特征在于：所述步驟(3)中自體血清量為10％。

4.根據權利要求1所述的培養方法，其特征在于：所述步驟(4)中的新的培養瓶是指未曾包被過的培養瓶。

5.一種NK細胞，其特征在于，所述的NK細胞是用權利要求1～4中任一項所述的培養方法所制備的。