[發明專利]唐棣的組織培養方法

在審

• 申請號: 201710233670.1
• 申請日: 2017-04-11
• 公開（公告）號: CN106962194A
• 公開（公告）日: 2017-07-21
• 發明（設計）人: 田英姿
• 申請（專利權）人: 烏魯木齊天格爾農業科技開發有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 烏魯木齊合縱專利商標事務所65105
• 代理人: 褚志武,周星瑩

1.一種唐棣的組織培養方法，其特征在于按下述步驟進行：

第一步，唐棣無菌苗的培養，將唐棣種子用水沖洗干凈，先用乙醇水溶液浸泡，乙醇水溶液浸泡后用無菌水沖洗，無菌水沖洗后再用HgCl2水溶液浸泡，HgCl2水溶液浸泡后用無菌水沖洗，最后將唐棣種子表面的水漬吸干后接種于MS培養基上，在溫度為22℃至26℃、光照強度為1500Lx至2000Lx、每天光照12h至14h進行培養，培養2d至3d后種子發芽，培養10d后得到唐棣無菌苗；

第二步，愈傷組織誘導，選取唐棣無菌苗的莖尖、莖段和葉片分別作為誘導愈傷組織，將莖尖和莖段切成小段，無菌苗的葉片切成小片，然后將切成小段的莖尖和莖段與切成小片的葉片消毒后，得到消毒后的愈傷組織；

第三步，唐棣叢生芽誘導培養，將消毒后的愈傷組織接種到培養基中，在溫度為23℃至26℃、光照強度為1400Lx至2000Lx、每天光照12h至14h進行培養，培養18d至22d后，分化獲得唐棣叢生芽；

第四步，唐棣無菌苗生根培養，將唐棣叢生芽切成單芽后置于裝有1/2MS生根培養基的瓶中，在溫度為23℃至26℃、光照強度為1400Lx至2000Lx、每天光照12h至14h進行培養，培養18d至22d后，得到唐棣帶根苗；

第五步，煉苗與移栽，將得到的唐棣帶根苗在室溫下打開瓶蓋，在瓶中加入少量自來水，煉苗2d至4d，待表面角質形成后將唐棣帶根苗取出，用自來水洗凈根部，洗凈根部后移栽到基質中并澆透水，培養28d至35d后移栽至大田。

2.根據權利要求1所述的唐棣的組織培養方法，其特征在于第一步中，唐棣種子為籽粒飽滿、大小一致的種子；或/和，第一步中，用自來水將唐棣種子沖洗干凈。

3.根據權利要求1或2所述的唐棣的組織培養方法，其特征在于第一步中，沖洗干凈后的唐棣種子先用體積百分比為70％的乙醇水溶液浸泡3min至6min，用無菌水沖洗2次至3次，再用質量百分比為0.1％的HgCl2水溶液浸泡8min至10min，浸泡后用無菌水沖洗4次至5次，最后用已滅菌的濾紙吸掉唐棣種子表面的水漬后接種于MS培養基上。

4.根據權利要求1或2所述的唐棣的組織培養方法，其特征在于第二步中，莖尖和莖段切成長為0.5cm至0.7cm的小段，無菌苗的葉片切成0.3cm×0.3cm的小片，然后將切成小段的莖尖和莖段與切成小片的葉片用體積百分比為70％的乙醇水溶液浸泡13s至17s進行消毒。

5.根據權利要求3所述的唐棣的組織培養方法，其特征在于第二步中，莖尖和莖段切成長為0.5cm至0.7cm的小段，無菌苗的葉片切成0.3cm×0.3cm的小片，然后將切成小段的莖尖和莖段與切成小片的葉片用體積百分比為70％的乙醇水溶液浸泡13s至17s進行消毒。

6.根據權利要求3或4所述的唐棣的組織培養方法，其特征在于第三步中，培養基為按1L MS培養基中加入1.0mg至1.5mg的6-芐氨基嘌呤混合后得到；或，第三步中，培養基為按1L MS培養基中加入0.1mg至0.5mg的萘乙酸混合后得到；或，第三步中，培養基為按1L MS培養基中加入0.1mg至0.5mg的2,4-二氯苯氧乙酸混合后得到；或，第三步中，培養基為按1L MS培養基中加入0.3mg的萘乙酸和1.0mg 4-(吲哚-3-基)丁酸混合后得到。

7.根據權利要求1或2或5所述的唐棣的組織培養方法，其特征在于第三步中，培養基為按1L MS培養基中加入1.0mg至1.5mg的6-芐氨基嘌呤混合后得到；或，第三步中，培養基為按1L MS培養基中加入0.1mg至0.5mg的萘乙酸混合后得到；或，第三步中，培養基為按1L MS培養基中加入0.1mg至0.5mg的2,4-二氯苯氧乙酸混合后得到；或，第三步中，培養基為按1L MS培養基中加入0.3mg的萘乙酸和1.0mg 4-(吲哚-3-基)丁酸混合后得到。

8.根據權利要求1或2或5所述的唐棣的組織培養方法，其特征在于第五步中，室溫溫度為23℃至26℃，基質為泥炭土和珍珠巖按質量比為1:1的混合物；或/和，第五步中，在溫度為20℃至28℃下培養28d至35d后移栽至大田，移栽時大田的溫度為20℃至28℃、相對濕度為75％至80％、遮陽率為70％至80％，移栽至大田后的一個星期內，每天噴水3次至5次。

9.根據權利要求3或4或6所述的唐棣的組織培養方法，其特征在于第五步中，室溫溫度為23℃至26℃，基質為泥炭土和珍珠巖按質量比為1:1的混合物；或/和，第五步中，在溫度為20℃至28℃下培養28d至35d后移栽至大田，移栽時大田的溫度為20℃至28℃、相對濕度為75％至80％、遮陽率為70％至80％，移栽至大田后的一個星期內，每天噴水3次至5次。