[發明專利]一種體外快速檢測胱抑素C的試紙條的制備方法在審
| 申請號： | 201710233363.3 | 申請日： | 2017-04-11 |
| 公開（公告）號： | CN113466460A | 公開（公告）日： | 2021-10-01 |
| 發明（設計）人： | 高玉珍;方敏敏;房鋼;閆華省 | 申請（專利權）人： | 上海方恩醫療用品有限公司 |
| 主分類號： | G01N33/577 | 分類號： | G01N33/577 |
| 代理公司： | 常州佰業騰飛專利代理事務所(普通合伙) 32231 | 代理人： | 高姍 |
| 地址： | 200231 上海*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 體外 快速 檢測 胱抑素 試紙 制備 方法 | ||
1.一種體外快速檢測胱抑素C的試紙條的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：
Ⅰ制備免疫金復合物：
(1)將胱抑素C單克隆抗體加入到膠體金溶液中，室溫進行反應；
(2)加入牛血清白蛋白以飽和游離的膠體金；
(3)離心處理，離心所得沉淀用含牛血清白蛋白的緩沖液進行多次清洗，得到免疫金復合物；
Ⅱ制備免疫層析試紙條：
(1)將免疫金復合物噴灑在玻璃纖維素膜上制成金標墊；
(2)在硝酸纖維素膜的檢測線上包被胱抑素C單克隆抗體，質控線上包被羊抗鼠IgG單克隆抗體；
(3)將樣品墊、玻璃纖維素膜、硝酸纖維素膜和吸水紙依次組裝在PVC底板上，按需裁切成合適寬度的試紙；
(4)將裁切好的試紙條裝在卡殼里，壓緊卡殼后即可用于檢測。
2.根據權利要求1所述的體外快速檢測胱抑素C的試紙條的制備方法，其特征在于：所述膠體金溶液的制備方法如下：
(1)將氯金酸水溶液加熱至沸；
(2)邊攪拌邊加入檸檬酸三鈉水溶液；
(3)繼續加熱煮沸，淡黃色的氯金酸水溶液在檸檬酸鈉加入后變灰色，繼而轉成黑色，隨后逐漸穩定成紅色后停止加熱，冷卻即可。
3.根據權利要求1所述的體外快速檢測胱抑素C的試紙條的制備方法，其特征在于：所述胱抑素C單克隆抗體由雜交瘤細胞系5F2或雜交瘤細胞系1E11分泌制得，雜交瘤細胞系5F2保藏號為：CCTCC NO:C201239，雜交瘤細胞系1E11保藏號為：CCTCC NO:C201253。
4.根據權利要求3所述的體外快速檢測胱抑素C的試紙條的制備方法，其特征在于：所述胱抑素C單克隆抗體的制備方法為：使用佐劑預處理小鼠，在小鼠腹腔內接種雜交瘤細胞系5F2或雜交瘤細胞系1E11，分泌單克隆抗體，然后抽取腹水，分離獲得所述胱抑素C單克隆抗體。
5.根據權利要求4所述的體外快速檢測胱抑素C的試紙條的制備方法，其特征在于：分離獲得所述胱抑素C單克隆抗體的具體方法為：收集腹水，并用硫酸銨、辛酸沉淀，然后用ProteinG預裝層析柱純化沉淀，獲得胱抑素C單克隆抗體。
6.根據權利要求2所述的體外快速檢測胱抑素C的試紙條的制備方法，其特征在于：制備膠體金溶液時，氯金酸水溶液的質量濃度為0.01％，檸檬酸三鈉水溶液的質量濃度為1％。
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