[發明專利]一種ASE?HPLC法測定酸棗仁中斯皮諾素含量的方法

在審

• 申請號: 201710232354.2
• 申請日: 2017-04-11
• 公開（公告）號: CN106885860A
• 公開（公告）日: 2017-06-23
• 發明（設計）人: 王麗麗;廖強;歐妮;韋日偉;陳學松
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區梧州食品藥品檢驗所
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 廣州市越秀區海心聯合專利代理事務所(普通合伙)44295
• 代理人: 蔡國

技術領域

本發明屬于化學檢測領域，尤其是一種ASE-HPLC法測定酸棗仁中斯皮諾素含量的方法。

背景技術

《中國藥典》2015年版一部制備供試品方法為取本品粉末(過四號篩)約1g，精密稱定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)適量，加熱回流4小時，棄去石油醚液，藥渣揮去溶劑，轉移至錐形瓶中，加入70％乙醇20ml，加熱回流2小時，濾過，濾渣用70％乙醇5ml洗滌，合并洗液與濾液，回收溶劑至干，殘渣加甲醇溶解，轉移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

該方法回流時間長，對技術人員的專業水平要求較高。

發明內容

針對上述不足，本發明旨在提供一種耗時短且能達到同樣效果的ASE-HPLC法測定酸棗仁中斯皮諾素含量的方法。

為了解決上述技術問題，本發明提供的技術方案是這樣的：一種ASE-HPLC法測定酸棗仁中斯皮諾素含量的方法，依次包括下述步驟：

步驟1：采用ASE法對酸棗仁粉末進行萃取，其中所述的ASE法包括先用正己烷，再用甲醇萃取，并收集甲醇萃取液；

步驟2：采用HPLC法對甲醇萃取液中的斯皮諾素含量。

優選地，所述的步驟1包括下述子步驟：

步驟S1：將酸棗仁樣品粉碎，過篩，取1g與1g硅藻土混合均勻；

步驟S2：將步驟1所得的混合物裝于放有濾膜的10ml ASE萃取池中，加硅藻土至與池口平行；

步驟S3：用25ml正己烷萃取除雜，再用25ml甲醇萃取，用甲醇定容至50ml。

優選地，步驟S3所述的除雜步驟的參數為：溫度為80℃，時間為8min，次數為1次，沖洗體積為60％，吹掃時間為60s。

優選地，步驟S3所述的萃取步驟的參數為：溫度為100℃，時間為8min，次數為1次，沖洗體積為60％，吹掃時間為60s。

優選地，步驟1所述的HPLC法的檢測參數為：色譜柱為Thermo AQ；柱溫為40℃；流速為0.3mL/min；流動相為乙腈-水；檢測波長為335nm。

優選地，所述的色譜柱的規格為1.7μm，50×2.1mm。

優選地，所述的流動相采用梯度洗脫的方法加入，其中具體的參數如下：

洗脫總時間為30min；

第0～10min，流動相中乙腈-水的體積比為12～19：88～81；

第10～16min，流動相中乙腈-水的體積比為19～20：81～80；

第16～22min，流動相中乙腈-水的體積比為20～100：80～0；

第22～30min，流動相中乙腈-水的體積比為100：0。

本發明與傳統方法相比，具有以下優點：

1、本發明提高了溫度降低溶劑的黏度，減少溶劑進入樣品基體的阻止，增加了溶劑進入樣品基體的擴散，降低溶劑和樣品基體之間的表面張力，使溶劑溶解待測物的容量增加；

2、由于液體對溶質的溶解能力遠大于氣體對溶質的溶解能力，所以萃取液體的沸點隨壓力升高而提高，從而使溶劑在高溫高壓下仍保持在液態；

3、本發明曾對快速溶劑萃取使用的溶劑進行考察，有論文提到使用70％乙醇提取斯皮諾素相對含量較高，雜質較少，故對使用甲醇和70％乙醇進行了溶劑考察，結果顯示甲醇與70％乙醇提取斯皮諾素含量一致，且雜質峰基本相同，故采用甲醇提取溶劑；

4、本發明主要考察萃取次數對結果的影響，實驗中用ASE單次萃取的方法對樣品重復提取三次，分別接收每次的樣品液，分析其結果，結果表明萃取一次幾乎完全，故萃取次數采用1次以節省時間；

5、本發明所述的ASE提取方法的重復性良好。

附圖說明

圖1為斯皮諾素對照品的色譜圖；

圖2為采用ASE法萃取所得的斯皮諾素的色譜圖；

圖3為采用藥典方法萃取所得的斯皮諾素的色譜圖；

圖4為以斯皮諾素對照品的濃度(mg)-峰面積進行的線性回歸圖。

具體實施方式

下面結合具體實施方式，對本發明的權利要求書做進一步的詳細說明，但不構成對本發明的任何限制，任何在本發明權利要求保護范圍內所做的有限次修改，人在本發明的權利要求保護范圍之內。

實施例1

1、儀器設備及試劑

1.1儀器：電子分析天平(XA205DU)、ASE350快速溶劑萃取儀(美國DIONEX公司)、Thermo U3000UHPLC液相色譜儀。

1.2試劑：

水：符合GB/T 6682規定的一級水；