[發明專利]一種茶葉鮮樣中游離氨基酸含量的快速分析方法

在審

• 申請號: 201710231647.9
• 申請日: 2017-04-11
• 公開（公告）號: CN107091898A
• 公開（公告）日: 2017-08-25
• 發明（設計）人: 劉騰飛;董明輝;張麗;楊代鳳;顧俊榮;范君;錢輝
• 申請（專利權）人: 蘇州市農業科學院
• 主分類號: G01N30/74
• 分類號: G01N30/74;G01N30/02
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司32103
• 代理人: 馬明渡,楊超

技術領域

本發明涉及分析化學領域，具體涉及一種茶葉鮮樣中游離氨基酸含量的快速分析方法，該快速分析方法能夠同時分離、分析茶葉鮮樣中18種游離氨基酸。

背景技術

茶是世界三大天然飲料之一，具有獨特的香氣、豐富的營養和保健功效，深受消費者喜愛。茶葉中含有豐富的氨基酸，它們是構成茶葉滋味的重要成分，直接影響茶葉的品質。茶葉中的氨基酸主要有兩種存在形式，一種以游離態形式存在；另一種以結合態存在于肽和蛋白質中。其中，游離氨基酸，如茶氨酸、谷氨酸、精氨酸、絲氨酸等，是茶葉中一類重要的含氮物質，它們不僅是合成茶葉蛋白的基本單位，還是合成許多與代謝有關的生理活性物質的基質，其組成、含量及在加工過程中的降解產物和轉化產物以及這些組分間的含量變化均直接影響到茶葉香氣和滋味，對茶葉的品質具有重要作用。因此，茶葉中游離氨基酸的分析研究對茶葉的開發利用、工藝控制、品質鑒定和營養價值評價都具有十分重要的意義。

現今對茶葉中游離氨基酸分析方法的研究中以干樣較多和較為成熟，如國標GB/T8303-2013中規定，茶樣需磨碎后在電熱恒溫干燥箱中加熱、除去水分至恒重后再用于氨基酸含量的測定。由于干樣通常經高溫殺青、烘干和粉碎而成，高溫過程中蛋白質變性，其蛋白酶的生物活性喪失，易造成蛋白質降解導致游離氨基酸含量增加，同時烘干等步驟可能會引起茶葉各種生化成分的轉化，使得測定的數據并不能反應茶葉中氨基酸的真實水平，從而產生檢測誤差。

目前，茶葉中氨基酸的分析方法有很多，主要有茚三酮比色法、氣相色譜及其質譜聯用法、毛細管電泳法、高效液相色譜法等。經典的氨基酸分析方法一般采用氨基酸分析儀，使用茚三酮作為衍生試劑柱后衍生測定。但氨基酸分析儀價格昂貴，分析時間長，專屬性強，只能用于分析氨基酸，限制了其廣泛應用。相對于其他幾種方法，柱前衍生-高效液相色譜法無需特殊反應裝置，具有儀器普及率高、分析時間短、方法靈活多樣、靈敏度高、易于推廣的優點，逐漸成為氨基酸檢測的常規手段。中國發明專利“利用反相高效液相色譜檢測茶葉中游離氨基酸的方法”（CN104678044A）以6-氨基喹啉-N-羥基琥珀酰亞胺基氨基甲酸酯為柱前衍生劑，使用氨基酸專用分析柱進行梯度洗脫，結合反相高效液相色譜，實現了對茶葉中谷氨酰胺等19種氨基酸的定量分析。但該發明采用氨基酸分離專用色譜柱，需要進行復雜的梯度分離，使用成本高，運行周期長（1h左右），在大量樣品分析過程中，十分的費時，不利于氨基酸的快速分析和推廣普及。更重要的是，該發明沒有對方法的準確性、靈敏性、精密性等進行必要的方法學檢驗，技術效果無法得到有效保障。

發明內容

本發明提供一種茶葉鮮樣中游離氨基酸含量的快速分析方法，其目的在于解決現有的茶葉氨基酸分析方法中存在的速度慢、效率低、成本高、基礎應用推廣難等問題。

為達到上述目的，本發明采用的技術方案是：一種茶葉鮮樣中游離氨基酸含量的快速分析方法，包括以下兩部分：

第一部分，配制溶液，再用高效液相色譜-熒光檢測法建立已知梯度濃度的被測的游離氨基酸的標準曲線；所述標準曲線的建立由以下步驟組成：

步驟（1），準備氨基酸標準品，分別為天冬氨酸、絲氨酸、谷氨酸、組氨酸、甘氨酸、精氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、脯氨酸、茶氨酸、胱氨酸、酪氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、賴氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸；

步驟（2），分別配制0.14 mol/L的磷酸鹽緩沖液、0.4mol/L的硼酸鹽緩沖液、0.8mg/mL的AQC衍生液、6種濃度的氨基酸混合標準工作溶液，6種濃度的氨基酸混合標準工作溶液中各氨基酸的濃度為：

天冬氨酸5μmol/L、10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、250μmol/L；

絲氨酸5μmol/L、10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、250μmol/L；

谷氨酸5μmol/L、10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、250μmol/L；

組氨酸5μmol/L、10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、250μmol/L；

甘氨酸5μmol/L、10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、250μmol/L；

精氨酸5μmol/L、10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、250μmol/L；