[發明專利]催化UDP-鼠李糖生物合成的基因CsRHMb及其編碼蛋白和應用

有效

• 申請號: 201710230581.1
• 申請日: 2017-04-10
• 公開（公告）號: CN106916838B
• 公開（公告）日: 2019-09-20
• 發明（設計）人: 高麗萍;代新龍;黃克依;趙貴福;趙月;石渝鳳;黎明;夏濤
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: C12N15/61
• 分類號: C12N15/61;C12N9/90;C12P19/24;C12P19/02
• 代理公司: 北京市京大律師事務所 11321
• 代理人: 王凝;李洪群

1.催化UDP-鼠李糖生物合成的基因CsRHMb，其特征在于，基因CsRHMb為：SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。

2.由權利要求1所述基因CsRHMb編碼的蛋白。

3.根據權利要求2所述的蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

4.含有權利要求1所述基因CsRHMb的表達盒。

5.含有權利要求1所述基因CsRHMb或權利要求4所述表達盒的載體。

6.含有權利要求1所述基因CsRHMb、權利要求4所述表達盒或權利要求5所述載體的工程菌。

7.根據權利要求6所述的工程菌，其特征在于，其是將所述基因CsRHMb插入pMAL-c2X載體的多克隆位點中構建得到重組載體pMAL-c2X-CsRHMb，然后將重組載體轉化至大腸桿菌Novablue（DE3）中得到的。

8.權利要求2或3所述蛋白，或者權利要求6或7所述工程菌在催化UDP-葡萄糖合成UDP-鼠李糖中的應用。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，其是向含有UDP-葡萄糖、NAD和NADPH的反應體系中，加入權利要求2或3所述蛋白，或者從權利要求6或7所述工程菌中分離純化的重組蛋白rCsRHMb，通過酶催化反應，生物合成UDP-鼠李糖。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，總反應體系為50 μL：含有3 mM UDP-葡萄糖、3 mM NAD和3 mM NADPH，反應緩沖液為100 mM pH8.0-10.0的NaH₂PO₄/Na₂HPO₄混合液，以及10-20 μg權利要求2或3所述蛋白，或者所述重組蛋白rCsRHMb；

最適酶反應條件為：pH控制在8.0-10.0的NaH₂PO₄/Na₂HPO₄緩沖液，反應溫度25-45℃。