[發(fā)明專利]一種利用定點(diǎn)突變及酶切技術(shù)制備熒光分子量內(nèi)標(biāo)的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710228420.9
• 申請日: 2017-04-10
• 公開（公告）號: CN106868001A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 榮海博;管樺;姜伯瑋;阮德林;張濤;金川;王峰;張黎明
• 申請（專利權(quán)）人: 公安部第一研究所;北京中盾安民分析技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京科億知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種利用定點(diǎn)突變及酶切技術(shù)制備熒光分子量內(nèi)標(biāo)的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1將目的DNA片段A克隆進(jìn)質(zhì)粒載體，得到重組質(zhì)粒B；

S2以步驟S1中得到的重組質(zhì)粒B為模板，在DNA片段A的不同長度位置分別進(jìn)行定點(diǎn)突變，引入限制性酶切位點(diǎn)，并得到相應(yīng)的重組質(zhì)粒C；

S3設(shè)計DNA片段A的擴(kuò)增引物F1、R1，并分別在引物5’端進(jìn)行熒光標(biāo)記；

S4利用擴(kuò)增引物F1、R1擴(kuò)增重組質(zhì)粒C，得到擴(kuò)增產(chǎn)物D，將產(chǎn)物D進(jìn)行純化；

S5利用限制性內(nèi)切酶酶切純化后的擴(kuò)增產(chǎn)物D，得到酶切產(chǎn)物E，即熒光分子量內(nèi)標(biāo)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S1中，DNA片段A長度為10bp到5000bp。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S2中，所述限制性酶切位點(diǎn)為黏性末端的酶切位點(diǎn)或者平末端的酶切位點(diǎn)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟S2中，所述限制性酶切位點(diǎn)為BamHI、HindIII、EcorV或EcorI。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S3中，熒光標(biāo)記為能與DNA堿基結(jié)合并能被488nm-605nm激光激發(fā)出熒光的物質(zhì)。

6.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的方法，其特征在于，所述熒光標(biāo)記為ROX、HEX、FAM、CY3、CY5或LIZ。