[發(fā)明專利]一種提高頭孢菌素C酰化酶活性的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710225603.5
• 申請(qǐng)日: 2017-04-07
• 公開（公告）號(hào): CN108690849A
• 公開（公告）日: 2018-10-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 余少文;蒙秋平;謝寧;胡萍;潘慶;湯新
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/70
• 分類號(hào): C12N15/70;C12N9/80;C12R1/19
• 代理公司: 深圳市德錦知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44352
• 代理人: 黃萍

1.一種提高頭孢菌素C酰化酶活性的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)制備卡那霉素抗性基因和ptsG基因雙缺陷型的大腸桿菌菌株；

(2)將攜帶頭孢菌素C酰化酶基因的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化所述大腸桿菌菌株，獲得轉(zhuǎn)化子；

(3)培養(yǎng)并誘導(dǎo)所述轉(zhuǎn)化子表達(dá)頭孢菌素C酰化酶。

2.一種培養(yǎng)如權(quán)利要求1所述方法中轉(zhuǎn)化子的培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基包括以下配方：1％胰蛋白胨，0.5％酵母提取物，1％NaCl，0.3％甘油，PH為8.0。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述大腸桿菌為大腸桿菌BL21(DE3)。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2所述攜帶頭孢菌素C酰化酶基因的表達(dá)載體選自為pET-28a-CPCAcy、pACYCDuet-1-CPCAcy、pETDuet-1-CPCAcy和pRSFDuet-1-CPCAcy。

5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述表達(dá)載體為pACYCDuet-1-CPCAcy。

6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2所述轉(zhuǎn)化選用化學(xué)轉(zhuǎn)化法。

7.如權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述PH8.0使用的是磷酸鹽緩沖液。

8.如權(quán)利要求1所述的方法在提高頭孢菌素C酰化酶活性中的應(yīng)用。