[發(fā)明專利]重組LTB-CTB載體蛋白及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710221420.6
• 申請日: 2017-04-06
• 公開（公告）號: CN107098976B
• 公開（公告）日: 2018-08-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳克
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢博沃生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/70;A61K39/39;A61K39/106;A61P31/04
• 代理公司: 上海精晟知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31253
• 代理人: 熊嫻;馮子玲

本發(fā)明公開了一種重組LTB?CTB載體蛋白及其制備方法和應(yīng)用，包括：大腸桿菌不耐熱腸毒素B亞單位蛋白表達(dá)核酸序列(LTB)及霍亂弧菌腸毒素B亞單位蛋白表達(dá)核酸序列(CTB)，其中LTB核酸序列與CTB核酸序列通過引物序列橋接，構(gòu)建的LTB?CTB核酸序列。本發(fā)明提供的載體蛋白不僅具有良好的免疫原性，更具有良好的免疫佐劑效果，可以引起良好的黏膜免疫效果，可以作為多種抗原的優(yōu)良載體，具有廣泛的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種重組LTB-CTB載體蛋白及其制備方法和應(yīng)用，屬于疫苗領(lǐng)域。

背景技術(shù)

一、病原微生物與疫苗

能引起人體或動物體發(fā)生傳染病的微生物，稱為病原微生物或致病微生物。傳染是指病原微生物侵入機(jī)體后，在一定的部位生長、繁殖，并引起一系列病理生理的過程。當(dāng)病原微生物侵入機(jī)體后，病原微生物與機(jī)體互相作用，互相改變對方的活性與功能，因此能否引起傳染病，一方面取決于病原微生物的致病能力即致病性或毒力，另方面還取決于機(jī)體的抵抗力即免疫力。病原性細(xì)菌引起傳染的能力大小，就是細(xì)菌的毒力或致病性。細(xì)菌毒力的有無和毒力的強(qiáng)弱主要取決于它的侵襲力、產(chǎn)毒素性和引起超敏反應(yīng)的能力。

細(xì)菌產(chǎn)生的毒素可分為外毒素和內(nèi)毒素兩大類。外毒素是病原菌在生長繁殖期間分泌到周圍環(huán)境種的一種代謝產(chǎn)物，主要由革蘭氏陽性菌產(chǎn)生，少數(shù)革蘭氏陰性菌也能產(chǎn)生。其化學(xué)組成是蛋白質(zhì)，抗原性強(qiáng)，毒性也強(qiáng)，但極不穩(wěn)定，對熱和某些化學(xué)物質(zhì)敏感，容易受到破壞。常見的如：白喉棒桿菌產(chǎn)生的白喉外毒素、破傷風(fēng)梭菌產(chǎn)生的破傷風(fēng)毒素、霍亂弧菌產(chǎn)生的腸毒素、肉毒梭菌產(chǎn)生的肉毒毒素等。大多數(shù)革蘭氏陰性細(xì)菌能產(chǎn)生內(nèi)毒素，實(shí)際上它存在于細(xì)菌細(xì)胞壁的外層，屬于細(xì)胞壁的組成部分，一般情況下并不分泌到環(huán)境中，只有當(dāng)細(xì)菌溶解后才釋放出來，因而稱為內(nèi)毒素，其毒性比外毒素要低，抗原性也弱。

同種生物的不同個體，當(dāng)它們與病原菌接觸后，有的患病，有的則安然無恙，原因在于不同個體的免疫力不同。免疫就是指機(jī)體識別和排除抗原異物(如病原微生物等)的一種保護(hù)性反應(yīng)。一般來講，它對機(jī)體是有利的，在異常條件下，也可能損害機(jī)體。人體的免疫分為非特異性免疫和特異性免疫。其中特異性免疫是指機(jī)體針對某一種或某一類微生物或產(chǎn)物所產(chǎn)生的特異抵抗力。而疫苗即是科學(xué)家研制出來使機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫抵抗病原微生物對人體侵害的生物制品，通常由病原微生物本身加以制備而成的。細(xì)菌、病毒和立克次氏體等病原微生物制成疫苗，注射機(jī)體后，使機(jī)體產(chǎn)生特異性或致敏性淋巴細(xì)胞，分泌抗體，達(dá)到特異性免疫效果。

而疫苗又分為治療性和預(yù)防性兩種，通過治療性疫苗治療疾病，并通過預(yù)防性疫苗保護(hù)人體不受致病性微生物的侵害。經(jīng)過多年的努力，醫(yī)學(xué)界已經(jīng)開發(fā)出各種不同的疫苗用以預(yù)防，諸如細(xì)菌、病毒和真菌等，感染造成的各種疾病，極大地提高了人類的健康水平。生物技術(shù)的不斷發(fā)展，促進(jìn)了疫苗品種的多樣化。用以預(yù)防病毒導(dǎo)致的傳染病有滅活病毒技術(shù)開發(fā)出來的疫苗，如乙腦疫苗、脊髓灰質(zhì)炎疫苗、流感疫苗等；減毒病毒技術(shù)開發(fā)出來的減毒活疫苗，如輪狀病毒疫苗、口服脊髓灰質(zhì)炎病毒疫苗、麻疹病毒疫苗、腮腺炎病毒疫苗、風(fēng)疹病毒疫苗和水痘疫苗等。用以預(yù)防細(xì)菌性傳染病的有用蛋白和多糖等生物大分子純化技術(shù)開發(fā)出來的細(xì)菌類疫苗，如破傷風(fēng)類毒素、白喉類毒素、百日咳類毒素及其亞細(xì)胞組分、流行性腦膜炎球菌多糖和23價(jià)肺炎球菌多糖等。更先進(jìn)的有用半化學(xué)結(jié)合技術(shù)開發(fā)出來的預(yù)防腦膜炎和肺炎的細(xì)菌疫苗，如流行性嗜血桿菌b型多糖-蛋白綴合疫苗、7價(jià)或10價(jià)肺炎球菌多糖-蛋白綴合疫苗以及4價(jià)腦膜炎球菌多糖-蛋白綴合疫苗。通過對生物技術(shù)的不斷改進(jìn)，能夠開發(fā)出更多的新型疫苗產(chǎn)品來應(yīng)付不同的病原微生物對人類健康的挑戰(zhàn)。

二、黏膜免疫