[發(fā)明專利]重組LTB-CTB載體蛋白及其制備方法和應用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710221420.6 | 申請日： | 2017-04-06 |
| 公開（公告）號： | CN107098976B | 公開（公告）日： | 2018-08-28 |
| 發(fā)明（設計）人： | 吳克 | 申請（專利權(quán)）人： | 武漢博沃生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C07K19/00 | 分類號： | C07K19/00;C12N15/70;A61K39/39;A61K39/106;A61P31/04 |
| 代理公司： | 上海精晟知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31253 | 代理人： | 熊嫻;馮子玲 |
| 地址： | 430075 湖北省武漢市東湖高新區(qū)*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 重組 ltb ctb 載體 蛋白 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種重組LTB-CTB載體蛋白，其特征在于，所述載體蛋白包括：大腸桿菌不耐熱腸毒素B亞單位蛋白(LTB)及霍亂弧菌腸毒素B亞單位蛋白(CTB)，其中LTB核酸序列與CTB核酸序列通過引物序列橋接，編碼的載體蛋白序列如序列表SEQ ID NO：6所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組LTB-CTB載體蛋白，其特征在于：編碼LTB蛋白的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：2所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組LTB-CTB載體蛋白，其特征在于：編碼CTB蛋白的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：4所示。
4.權(quán)利要求1所述的重組LTB-CTB載體蛋白的制備方法，其特征在于：步驟包括：
S1.根據(jù)LTB和CTB的CDS區(qū)核酸序列，設計兩對引物，構(gòu)建pET28a-LTB-CTB質(zhì)粒，PCR擴增后，通過BamHⅠ和XhoⅠ雙酶切，凝膠回收LTB-CTB片段和表達載體pET28a；
S2.連接轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α菌株，篩選陽性克隆后進行單克隆擴增，IPTG誘導后鑒定。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組LTB-CTB載體蛋白在制備多糖-蛋白綴合疫苗中的應用。
6.一種霍亂疫苗，其特征在于，霍亂脂多糖與如權(quán)利要求1所述的重組LTB-CTB載體蛋白結(jié)合。
7.一種肺炎球菌多糖蛋白疫苗，其特征在于：肺炎球菌莢膜多糖與如權(quán)利要求1所述的重組LTB-CTB載體蛋白結(jié)合。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的肺炎球菌多糖蛋白疫苗，其特征在于：所述肺炎球菌莢膜多糖是分離提純血清型肺炎球菌莢膜上的莢膜多糖，所述血清型肺炎球菌的血清型包括1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F和/或33F。
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