[發明專利]一種草莓成花促進基因FaLFY5、表達載體、構建方法及應用

在審

• 申請號: 201710219922.5
• 申請日: 2017-04-06
• 公開（公告）號: CN106929517A
• 公開（公告）日: 2017-07-07
• 發明（設計）人: 劉月學;鄒冬梅;張志宏;馬躍;張麗杰;李賀
• 申請（專利權）人: 沈陽農業大學
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/82;C12N15/10;C12N15/66;A01H5/00
• 代理公司: 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙)61223
• 代理人: 潘宏偉

1.一種草莓成花促進基因FaLFY5，其特征在于，所述草莓成花促進基因FaLFY5的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一種含有權利要求1所述的草莓成花促進基因FaLFY5的表達載體，其特征在于，所述表達載體是將如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列插入植物表達載體pCAMBIA1304中得到的。

3.根據權利要求1所述的草莓成花促進基因FaLFY5的克隆方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

步驟1，提取草莓花芽總RNA，然后反轉錄獲得cDNA第一鏈；

步驟2，設計擴增引物，所述擴增引物為：

上游引物F1：5'-ATGGATCCAAACGCGTTCACT-3'

下游引物R1：5'-TCAGTAGGGAAGCGGATCAGT-3'；

然后以反轉錄獲得cDNA第一鏈為模板，進行PCR擴增，得到草莓成花促進基因FaLFY5，并將草莓成花促進基因FaLFY5連接到pGM-T載體保存。

4.根據權利要求2所述的表達載體的構建方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

S1，提取草莓花芽總RNA，然后反轉錄獲得cDNA鏈；

S2，根據植物表達載體pCAMBIA1304的多克隆微點序列特點，設計一對引入Nco Ⅰ和Bgl II酶切位點的引物序列，所述引物序列為：

上游引物F2：5'-CATGCCATGGATGGATCCAAACGCGTTCACT-3'

下游引物R2：5'-GAAGATCTTCAGTAGGGAAGCGGATCAGT-3'；

再以步驟S1中的cDNA鏈為模板，進行PCR擴增，得到的擴增產物連接到pGM-T載體，得到重組質粒pGM-T-FaLFY5；

S3，利用Nco Ⅰ和Bgl II雙酶切重組質粒pGM-T-FaLFY5，回收短序列片段的pGM-T-FaLFY5酶切產物；利用Nco Ⅰ和Bgl II雙酶切植物表達載體pCAMBIA1304，回收長序列片段的pCAMBIA1304酶切產物；

S4，將短序列片段的pGM-T-FaLFY5酶切產物和長序列片段的pCAMBIA1304酶切產物經T4DNA連接酶連接，得到表達載體，并將所述表達載體命名為植物表達載體pCAMBIA1304-FaLFY5。

5.一種根據權利要求1所述的草莓成花促進基因FaLFY5在促進植物提早成花的分子育種中的應用。

6.一種根據權利要求2所述的表達載體在促進植物提早成花的分子育種中的應用。