[發明專利]一種次氯酸熒光探針及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201710219195.2
• 申請日: 2017-04-06
• 公開（公告）號: CN107056774B
• 公開（公告）日: 2019-08-13
• 發明（設計）人: 林偉英;任明光;鄧貝貝
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: C07D417/06
• 分類號: C07D417/06;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 李桂存

本發明通過分子結構設計，提供一種具有響應速度快，選擇性好，靈敏度高的次氯酸熒光探針及其制備方法和該次氯酸熒光探針在檢測水溶液及細胞內次氯酸中的應用。所述熒光探針可應用于水溶液或生物體系中次氯酸的檢測；所述檢測包含熒光檢測、細胞成像和和目視比色。在一定濃度范圍內，熒光強度與次氯酸濃度呈線性正相關，實現定量測定次氯酸的濃度。本發明的次氯酸探針合成簡單，后處理過程相對簡單；實現了次氯酸分子探針的選擇性快速檢測，并且選擇性好，抗其他分子干擾能力強，是一種簡單，快速，靈敏的次氯酸分子特異性檢測試劑，在生物分子檢測領域具有廣闊的應用前景。

技術領域

本發明涉及一種快速檢測次氯酸的熒光探針及其制備和在檢測細胞中次氯酸的應用，屬于分析化學技術領域。

背景技術

次氯酸（HClO）屬于活性氧的一種，作為一種高效的殺菌劑，在生命的免疫系統中起到重要的作用。細胞內源性的次氯酸主要由白細胞（如單核細胞，嗜酸性細胞，嗜中性粒細胞等）中的髓過氧化物酶系統產生。細胞免疫反應產生可產生次氯酸，但是一旦細胞中次氯酸的濃度發生異常，就會引起包括風濕性關節炎、心血管疾病和癌癥在內的多種疾病。在細胞內溶酶體作為一類較為重要的細胞器，次氯酸可以維持溶酶體的氧化-還原的平衡，對溶酶體的功能的穩定起到了十分重要的作用，檢測溶酶體內次氯酸對判斷機體狀態具有重要意義。

可用于選擇性檢測次氯酸/次氯酸鹽的方法有很多，如碘量滴定法、比色法、化學發光法、庫侖法、極譜法和輻解法等。然而，這些方法往往比較繁瑣，一些工作必須在有機介質或有機/水介質中進行，限制其應用。與傳統檢測方法相比，熒光探針被認為是生物研究理想的手段，因為熒光檢測所需的儀器相對簡單，選擇性和靈敏度高，檢測范圍廣，響應時間快速，而且檢測過程對樣品沒有破壞，對細胞危害也很小，熒光檢測結合顯微鏡可以提供實時檢測。HClO在生物細胞中，其濃度變化較快，所以檢測次氯酸的熒光探針需要一定的響應速度,以達到對生物體系次氯酸進行實時檢測的目的。生物體內存在大量的不同類型的氧化劑（如，超氧自由基，羥基自由基，過氧化氫，單線態氧等），在其他干擾離子或分子存在的條件下，專一性的對體內次氯酸進行識別，需要探針分子具有較好的抗干擾性。然而目前現有的次氯酸探針在生物體內的選擇專一性差、反應時間長。

發明內容

針對目前次氯酸分子熒光探針在生物體內的選擇專一性差、反應時間長的現狀，本發明通過分子結構設計，提供一種具有響應速度快，選擇性好，靈敏度高的次氯酸熒光探針。

本發明另一目的是提供一種過程簡單的該次氯酸探針的制備方法。

本發明再一目的是提供該次氯酸熒光探針在檢測水溶液及細胞內次氯酸中的應用。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案。

一種次氯酸熒光探針，具有如下式（I）所示的結構：

式（I）。

所述次氯酸熒光探針，簡稱為PZ-HClO，合成路線如下：

。

所述次氯酸熒光探針的制備方法，包括以下步驟：

（1）鄰羥基苯乙酮溶于乙酸乙酯中，將金屬鈉緩慢加入上述反應液中，反應得產物，產物萃取、干燥、脫溶，通過柱色譜分離得到化合物1-1；

（2）化合物1-1溶于乙酸中，加入硫酸，反應回流得產物，產物萃取、干燥、脫溶，通過柱色譜分離得到化合物1-2；

（3）化合物1-2和丙二腈溶于乙酸酐中，加熱回流反應得產物，產物萃取、干燥、脫溶，過柱色譜分離得到化合物1-3；

（4）吩噻嗪溶于DMF中，0℃下加入氫化鈉，反應到室溫時加入碘乙烷，繼續反應得產物，產物萃取、干燥、脫溶，通過柱色譜進行分離純化得到化合物2-1；