[發(fā)明專利]誘導(dǎo)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710218934.6
• 申請日: 2017-04-05
• 公開（公告）號: CN106834223B
• 公開（公告）日: 2020-03-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 顏學(xué)恒;薛宜青;熊延獅;張智培;蘇恩筠
• 申請（專利權(quán)）人: 上海逍鵬生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077
• 代理公司: 上海遠(yuǎn)同律師事務(wù)所 31307
• 代理人: 張堅

1.一種誘導(dǎo)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化的方法，其特征在于：該方法包括以下步驟：

步驟1)接種：經(jīng)分散成單個細(xì)胞的臍帶來源的間充質(zhì)干細(xì)胞懸浮于DMEM高糖培養(yǎng)基中形成細(xì)胞溶液，再將所述細(xì)胞溶液以250個/μL～2500個/μL的細(xì)胞濃度，滴在培養(yǎng)板上；步驟1)中，所述培養(yǎng)板為96孔板，將所述細(xì)胞溶液以100μL的體積滴在所述96孔板中；

步驟2)懸滴培養(yǎng)：將所述培養(yǎng)板倒置進(jìn)行懸滴培養(yǎng)24h～48h，獲得成簇種子細(xì)胞團(tuán)；

步驟3)加入分化培養(yǎng)基進(jìn)行懸滴培養(yǎng)：吸除所述培養(yǎng)板上的DMEM高糖培養(yǎng)基，加入軟骨分化培養(yǎng)基，繼續(xù)倒置所述培養(yǎng)板進(jìn)行懸滴培養(yǎng)獲得軟骨細(xì)胞團(tuán)。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：

所述步驟2)中懸滴培養(yǎng)的條件為37℃，5％CO₂以及飽和濕度。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：

所述步驟3)中加入分化培養(yǎng)基后懸滴培養(yǎng)的條件為37℃，5％CO₂以及飽和濕度；每2天更換分化培養(yǎng)基，培養(yǎng)總時長為15天。

4.如權(quán)利要求1至3中任意一項所述的方法，其特征在于：

步驟3)中所采用的軟骨分化培養(yǎng)基為無血清的軟骨分化培養(yǎng)基。