[發明專利]一步法快速構建擴增子文庫的方法

有效

• 申請號: 201710218529.4
• 申請日: 2017-04-05
• 公開（公告）號: CN106835292B
• 公開（公告）日: 2019-04-09
• 發明（設計）人: 閻海;王思振;焦宇辰;徐大勇;鄭喬松;師曉
• 申請（專利權）人: 北京泛生子基因科技有限公司
• 主分類號: C40B50/06
• 分類號: C40B50/06;C12N15/11
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司 11279
• 代理人: 田昕;葉立濤

本發明公開了一步法快速構建擴增子文庫的方法，包括以下步驟：1、合成用于構建DNA樣品的擴增子文庫的引物組合，所述用于構建DNA樣品的擴增子文庫的引物組合包括：根據目標擴增子設計的上游融合引物，根據目標擴增子設計的下游融合引物，上游通用引物和下游通用引物；2、構建DNA樣品的PCR反應體系；3、進行PCR。運用該方法可以簡便、快速的經1步構建擴增子文庫，且由于在PCR起始前就引入barcode，使得樣本及文庫間交叉污染的可能性大大降低。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及一種一步法快速構建擴增子文庫的方法。

背景技術

下一代測序(next-generation sequencing，NGS)由于高通量、高靈敏度、高度自動化等特性，近年來在疾病的研究和診斷治療中越來越多地被應用。NGS技術能實現多基因平行檢測，比傳統檢測方法節省樣本，且靈敏度更高，能更真實還原腫瘤變異全景。但LifeNGS平臺中傳統的構建擴增子文庫的方法步驟繁瑣，需要經過PCR擴增、消化、加接頭、純化等步驟，需要花費約5h；并且由于多步驟操作中需要開蓋，因此文庫易被污染，文庫損失率高；另外在傳統的構建擴增子文庫的方法中，單個樣品建立文庫的成本較高，為200-1000元/例。

公開于該背景技術部分的信息僅僅旨在增加對本發明的總體背景的理解，而不應當被視為承認或以任何形式暗示該信息構成已為本領域一般技術人員所公知的現有技術。

發明內容

本發明的目的在于提供一種一步法快速構建擴增子文庫的方法。該方法可以簡便、快速的經1步PCR構建擴增子文庫，且由于在PCR起始前就引入barcode，使得樣本及文庫間交叉污染的可能性大大降低，并能簡化實驗場地分區的要求，該方法還能將單個樣品建立文庫的成本控制在30元/例。

為實現上述目的，本發明提供了以下技術方案：

一種用于構建DNA樣品的擴增子文庫的方法，包括以下步驟：

1、合成用于構建DNA樣品的擴增子文庫的引物組合，所述用于構建DNA樣品的擴增子文庫的引物組合包括：

根據目標擴增子設計的上游融合引物，所述上游融合引物包括按照5’到3’的方向依次排列的第一接頭序列(Bridge序列)和根據目標擴增子設計的特異性上游引物序列；

根據目標擴增子設計的下游融合引物，所述下游融合引物包括按照5’到3’的方向依次排列的第二接頭序列(trP1序列)和根據目標擴增子設計的特異性下游引物序列；

上游通用引物，所述上游通用引物包括按照5’到3’的方向依次排列的第三接頭序列(A序列)、barcode序列和第一接頭序列；和

下游通用引物，所述下游通用引物包括按照5’到3’的方向依次排列的通用序列(Uni序列)和第二接頭序列；

2、構建DNA樣品的PCR反應體系,將根據目標擴增子設計的上游融合引物、根據目標擴增子設計的下游融合引物、上游通用引物和下游通用引物混合以作為PCR反應體系中的引物組合；

3、進行PCR。

上述用于構建DNA樣品的擴增子文庫的方法在另一種實施方式中，所述第一接頭序列包括SEQ ID:1序列，SEQ ID:1序列的核苷酸序列為GGCATACGTCCTCGTCTA。

上述用于構建DNA樣品的擴增子文庫的方法在另一種實施方式中，所述第二接頭序列包括SEQ ID:2序列，SEQ ID:2序列的核苷酸序列為TCTATGGGCAGTCGGTGAT。

上述用于構建DNA樣品的擴增子文庫的方法在另一種實施方式中，所述第三接頭序列包括SEQ ID:3序列，SEQ ID:3序列的核苷酸序列為CCATCTCATCCCTGCGTGTCTCCGACTCAG。