[發明專利]一步法快速構建擴增子文庫的方法有效
| 申請號： | 201710218529.4 | 申請日： | 2017-04-05 |
| 公開（公告）號： | CN106835292B | 公開（公告）日： | 2019-04-09 |
| 發明（設計）人： | 閻海;王思振;焦宇辰;徐大勇;鄭喬松;師曉 | 申請（專利權）人： | 北京泛生子基因科技有限公司 |
| 主分類號： | C40B50/06 | 分類號： | C40B50/06;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京中譽威圣知識產權代理有限公司 11279 | 代理人： | 田昕;葉立濤 |
| 地址： | 102206 北京市昌平區回龍觀鎮中關*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一步法 快速 構建 擴增 文庫 方法 | ||
1.一種用于構建DNA樣品的擴增子文庫的方法，其特征在于，包括以下步驟：
1)合成用于構建DNA樣品的擴增子文庫的引物組合，所述用于構建DNA樣品的擴增子文庫的引物組合包括：
根據目標擴增子設計的上游融合引物，所述上游融合引物包括按照5’到3’的方向依次排列的第一接頭序列(Bridge序列)和根據目標擴增子設計的特異性上游引物序列；
根據目標擴增子設計的下游融合引物，所述下游融合引物包括按照5’到3’的方向依次排列的第二接頭序列(trP1序列)和根據目標擴增子設計的特異性下游引物序列；
上游通用引物，所述上游通用引物包括按照5’到3’的方向依次排列的第三接頭序列(A序列)、barcode序列和第一接頭序列；和
下游通用引物，所述下游通用引物包括按照5’到3’的方向依次排列的通用序列(Uni序列)和第二接頭序列；
2)構建DNA樣品的PCR反應體系，將根據目標擴增子設計的上游融合引物、根據目標擴增子設計的下游融合引物、上游通用引物和下游通用引物混合以作為PCR反應體系中的引物組合；
3)進行PCR；
所述第一接頭序列包括SEQ ID:1序列；所述第二接頭序列包括SEQ ID:2序列；所述第三接頭序列包括SEQ ID:3序列；所述通用序列包括SEQ ID:4序列；
用于構建同一個DNA樣品的擴增子文庫的引物組合中，上游通用引物中的barcode序列相同；用于構建不同DNA樣品的擴增子文庫的引物組合中，上游通用引物中的barcode序列不同。
2.如權利要求1所述的用于構建DNA樣品的擴增子文庫的方法，其特征在于：當同一個PCR反應中的目標擴增子的數量＞1時，所述根據目標擴增子設計的上游融合引物為根據每一種目標擴增子設計的上游融合引物的組合，所述根據目標擴增子設計的下游融合引物為根據每一種目標擴增子設計的下游融合引物的組合。
3.如權利要求1所述的用于構建DNA樣品的擴增子文庫的方法，其特征在于：所述DNA樣品為基因組DNA。
4.如權利要求3所述的用于構建DNA樣品的擴增子文庫的方法，其特征在于：基因組DNA提取自組織樣本或福爾馬林固定石蠟包埋樣本。
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