[發(fā)明專利]基于模擬酶標(biāo)記銀納米粒子的高靈敏化學(xué)發(fā)光免疫分析方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710216740.2
• 申請(qǐng)日: 2017-03-31
• 公開（公告）號(hào): CN106970231A
• 公開（公告）日: 2017-07-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李萍;宗晨;張多多
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)藥科大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/58;G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種高靈敏化學(xué)發(fā)光成像免疫分析方法。其特征在于該分析方法由可拋式免疫傳感芯片(1)、模擬酶標(biāo)記銀納米粒子探針(2)和信號(hào)產(chǎn)生體系(3)構(gòu)成。其中(1)是在醛基基片上構(gòu)建4×12陣列，在每個(gè)傳感池內(nèi)化學(xué)包被捕捉抗體Ab1，制得可捕捉目標(biāo)抗原的傳感芯片；(2)是在銀納米粒子表面同時(shí)修飾信號(hào)抗體Ab2和結(jié)合了血紅素的G-四鏈體DNA(即模擬酶)制成；(3)是利用模擬酶的過(guò)氧化物酶特性催化過(guò)氧化氫氧化魯米諾的反應(yīng)，產(chǎn)生強(qiáng)化學(xué)發(fā)光信號(hào)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫分析方法，其特征在于所述的免疫傳感芯片是通過(guò)手工貼膜技術(shù)在醛基基片上獲得4×12陣列，其后在每個(gè)傳感池內(nèi)包被捕捉抗體Ab1制成。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫分析方法，其特征在于所述的模擬酶標(biāo)記銀納米粒子探針，是通過(guò)在銀納米粒子表面同時(shí)修飾信號(hào)抗體Ab2和高比例G-四鏈體DNA，并利用G-四鏈體DNA與血紅素結(jié)合形成模擬酶而制成。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫分析方法，其特征在于所述的模擬酶標(biāo)記銀納米粒子探針具有過(guò)氧化物酶特性，可催化化學(xué)發(fā)光底物過(guò)氧化氫氧化魯米諾的反應(yīng)，獲得強(qiáng)化學(xué)發(fā)光信號(hào)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫分析方法，其特征在于所述的模擬酶標(biāo)記銀納米粒子探針含有信號(hào)抗體Ab2，可通過(guò)夾心免疫反應(yīng)將探針結(jié)合到傳感陣列上，從而進(jìn)行高靈敏化學(xué)發(fā)光成像免疫分析，其具體分析步驟如下：

(1)在可拋式免疫傳感芯片的每個(gè)傳感池表面滴加標(biāo)準(zhǔn)溶液或待檢測(cè)樣品，進(jìn)行溫育；

(2)沖洗后，在每個(gè)傳感池表面滴加模擬酶標(biāo)記銀納米粒子探針，反應(yīng)結(jié)束后沖洗；

(3)在每個(gè)傳感池表面滴加化學(xué)發(fā)光底物，通過(guò)電感耦合裝置CCD相機(jī)進(jìn)行化學(xué)發(fā)光成像檢測(cè)；

(4)利用標(biāo)準(zhǔn)溶液獲得工作曲線，求出待測(cè)樣品中目標(biāo)蛋白質(zhì)(抗原)的濃度。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的免疫分析方法，其特征在于傳感陣列的48個(gè)傳感池可分別滴加48個(gè)不同樣品，同時(shí)檢測(cè)48種不同樣品中的目標(biāo)蛋白質(zhì)濃度。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的免疫分析方法，其特征在于沖洗液為含0.05％吐溫-20的0.01M磷酸鹽緩沖液，pH7.4。