[發(fā)明專(zhuān)利]一種用于前列腺癌治療評(píng)估的聯(lián)合基因標(biāo)志物及其檢測(cè)試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710215659.2
• 申請(qǐng)日: 2017-04-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106834526A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-06-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陸雯
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 毛強(qiáng)平
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于前列腺癌治療與診斷技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種用于對(duì)前列腺癌化療效果和耐藥性評(píng)估的基因聯(lián)合標(biāo)志物，以及由該聯(lián)合標(biāo)志物制備得到的檢測(cè)試劑盒。

背景技術(shù)

近年來(lái)，我國(guó)前列腺癌發(fā)病率顯著升高。與西方國(guó)家前列腺癌患者分期構(gòu)成不同，我國(guó)近70%的前列腺癌患者初診時(shí)就已是晚期轉(zhuǎn)移患者。雖然絕大多數(shù)患者對(duì)內(nèi)分泌治療敏感，但幾乎所有患者在治療18個(gè)月后會(huì)進(jìn)展至激素抵抗性前列腺癌(HRPC)，患者生存期一般不超過(guò)2年。2004年TAX327和SWOC-9916兩項(xiàng)研究結(jié)果表明，多西他賽為基礎(chǔ)的化療較米托蒽醌能顯著延長(zhǎng)HRPC患者的總體生存期，一舉奠定了其作為HRPC一線治療藥物的地位。但是，在臨床上仍然有患者出現(xiàn)多西他塞治療效果不佳的問(wèn)題，因此，預(yù)先對(duì)與多西他塞治療耐藥相關(guān)情況進(jìn)行評(píng)估具有重要意義。

miRNA是新近證明的一類(lèi)高度保守的、內(nèi)源性非編碼的小分子RNA，在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)基因的表達(dá)。最近的研究表明miRNA參與各種各樣的調(diào)節(jié)通路，包括生長(zhǎng)發(fā)育、細(xì)胞增殖和凋亡、信號(hào)傳導(dǎo)等一系列重要的生命調(diào)節(jié)過(guò)程。已發(fā)現(xiàn)miRNA的表達(dá)異常可能導(dǎo)致人類(lèi)多種疾病，如癌癥、自身免疫性疾病及腎臟疾病等。研究顯示miRNA參與調(diào)控人體細(xì)胞中細(xì)胞代謝、增值、分化、凋亡、免疫等過(guò)程；它的異常表達(dá)在疾病的發(fā)生發(fā)展中起了關(guān)鍵性作用。研究顯示miRNA在病理發(fā)展中會(huì)快速?gòu)慕M織中釋放入血，在血清、血漿、唾液和尿液中，這些胞外miRNA與腫瘤的不同病理狀態(tài)有關(guān)。Weber等釘檢測(cè)了12種來(lái)自于不同階段懷孕婦女和不同泌尿道上皮細(xì)胞腫瘤患者的體液和尿液標(biāo)本中的miRNA，應(yīng)用定量PCR對(duì)這些體液中的miRNA做廣譜分析。結(jié)果顯示miRNA在所有體液中均存在，在不同體液中

構(gòu)成比明顯不同，一些高水平的miRNA在多種體液中表達(dá)相同，而一些miRNA在特定體液中富集，還觀察到不同生理狀態(tài)的尿液標(biāo)本具有獨(dú)特的miRNA模式。提示使用特定miR-NA水平可用作檢測(cè)和監(jiān)測(cè)不同病理生理學(xué)狀態(tài)。

尿液中蘊(yùn)藏著大量生物學(xué)信息且具有無(wú)創(chuàng)收集、標(biāo)本處理相對(duì)簡(jiǎn)便的優(yōu)勢(shì)，檢測(cè)尿液中RNA類(lèi)的腫瘤標(biāo)志物還可以用于診斷其他泌尿系統(tǒng)的實(shí)體腫瘤，而且這類(lèi)循環(huán)miRNA的獨(dú)特表達(dá)模式與特定的疾病相關(guān)，特別是早期階段，其高特異性和敏感性的潛能可用于腫瘤分期和早期預(yù)測(cè)引。Bryant等使用含有742個(gè)miRNA的qRT-PCR芯片分析了78例前列腺癌患者和28例健康對(duì)照血清標(biāo)本，確定了12個(gè)表達(dá)量差異的miRNA。進(jìn)而檢測(cè)135份健康人與前列癌患者尿液標(biāo)本中5個(gè)選定的miRNA，發(fā)現(xiàn)腫瘤患者尿液中miR-107和miR-574-3p水平顯著高于健康對(duì)照，均可診斷出前列腺癌患者，并且準(zhǔn)確性高于檢測(cè)尿液前列腺特異性抗原(PSA)。

利用miRNA對(duì)多西他賽治療HRPC耐藥性能進(jìn)行判斷目前尚無(wú)研究。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供了可以用于對(duì)前列腺癌化療過(guò)程中耐藥性進(jìn)行預(yù)評(píng)估的分子標(biāo)記物組合，該分子標(biāo)記物是由2個(gè)前列腺癌敏感基因(P53基因、GSTP1基因)和1個(gè)miRNA(miRNA-155)所組成，可以應(yīng)用于對(duì)化療耐藥性的評(píng)估；同時(shí)，本發(fā)明還提供了應(yīng)用于評(píng)估的引物組和試劑盒；本發(fā)明還提供了上述引物組和試劑盒在分子標(biāo)記表達(dá)量的聯(lián)合判別方程（聯(lián)合標(biāo)志物）中的應(yīng)用。

本發(fā)明的第一個(gè)方面：

一種用于激素抵抗性前列腺癌化療耐藥效果評(píng)估的聯(lián)合標(biāo)記物，包括有P53基因、GSTP1基因和miRNA-155，以及內(nèi)參基因U6和GAPDH。

所述的化療是指多西他賽和潑尼松聯(lián)合治療。

本發(fā)明的第二個(gè)方面：

一種用于對(duì)上述聯(lián)合標(biāo)記物進(jìn)行檢測(cè)的試劑。

所述的試劑，是用于對(duì)聯(lián)合標(biāo)記物的表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)的試劑。

所述的試劑中包括有：

用于擴(kuò)增P53基因的引物對(duì)，其核苷酸序列如SEQ ID NO. 1～2所示；

用于擴(kuò)增GSTP1基因的引物對(duì)，其核苷酸序列如SEQ ID NO. 5～6所示；

用于miRNA-155反轉(zhuǎn)錄的引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO. 34所示；

用于擴(kuò)增miRNA-155反轉(zhuǎn)錄cDNA的引物對(duì)，其核苷酸序列如SEQ ID NO. 35～36所示；

用于擴(kuò)增內(nèi)參基因U6的引物對(duì)，其核苷酸序列如SEQ ID NO. 37～38所示；

用于擴(kuò)增內(nèi)參基因GAPDH的引物對(duì)，其核苷酸序列如SEQ ID NO. 39～40所示。