[發明專利]一種甘薯莖尖離體培養及組培苗病毒檢測的方法

在審

• 申請號: 201710213822.1
• 申請日: 2017-03-29
• 公開（公告）號: CN106973790A
• 公開（公告）日: 2017-07-25
• 發明（設計）人: 王立國;王剛;李燕;李建軍;高翔;張嘉
• 申請（專利權）人: 天津豐華裕隆農業發展有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;C12Q1/70
• 代理公司: 天津市新天方有限責任專利代理事務所12104
• 代理人: 張強

1.一種甘薯莖尖離體培養及組培苗病毒檢測的方法，其特征在于，具體步驟為：

(1)材料采集與消毒

于6月份剪取田間生長旺盛的甘薯苗頂芽，切去葉片，自來水沖洗40-50min，用無菌濾紙吸干水分，置于超凈工作臺上用75％酒精浸洗25s，再用0.1％升汞消毒5min，最后用無菌水沖洗7-8次，備用；

(2)莖尖剝離與培養

在雙目解剖鏡下，將消毒后的甘薯頂芽用注射器針尖剝去外層葉片，僅留1-2個葉原基，將5-6個大小為0.1-0.2mm的莖尖接種在初代培養基上進行培養，培養基中蔗糖為30g/L，瓊脂為6.0g/L，pH為5.8，培養溫度為25℃，光照強度2000-3000lx，光照時間12h/d，培養40天，得到組培苗；

(3)組培苗病毒檢測

采用指示植物針刺汁液沾接法進行病毒檢測：在巴西牽牛初生健康葉上，用滅菌注射器刺孔，然后將待測的甘薯葉片、葉柄及幼莖包扎在一起擠出汁液，沾接在針刺孔上，并以滅菌水及已知帶毒薯液同樣接種作為陰性對照和陽性對照，置于30℃防蟲網室內遮蔭保濕培養；接種后20天連續觀察記載癥狀，根據指示植物癥狀，在所有沾接的指示植物中只要有一株表現典型癥狀，該樣品即為陽性；根據檢測結果淘汰帶毒苗，保留脫毒苗。

2.根據權利要求1所述的一種甘薯莖尖離體培養及組培苗病毒檢測的方法，其特征在于，莖尖剝離與培養過程中初代培養基為MS+6-BA 1.0mg/L+NAA0.1mg/L。

3.根據權利要求2所述的一種甘薯莖尖離體培養及組培苗病毒檢測的方法，其特征在于，組培苗病毒檢測過程中沾接的指示植物表現的典型癥狀為新生葉出現系統性明脈、黃脈，以后發展為花葉或皺縮。