[發(fā)明專利]一種甘薯莖尖離體培養(yǎng)及組培苗病毒檢測的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710213822.1 | 申請日： | 2017-03-29 |
| 公開（公告）號： | CN106973790A | 公開（公告）日： | 2017-07-25 |
| 發(fā)明（設計）人： | 王立國;王剛;李燕;李建軍;高翔;張嘉 | 申請（專利權(quán)）人： | 天津豐華裕隆農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司 |
| 主分類號： | A01H4/00 | 分類號： | A01H4/00;C12Q1/70 |
| 代理公司： | 天津市新天方有限責任專利代理事務所12104 | 代理人： | 張強 |
| 地址： | 301816 天津市寶坻*** | 國省代碼： | 天津;12 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 甘薯 莖尖離體 培養(yǎng) 組培苗 病毒 檢測 方法 | ||
1.一種甘薯莖尖離體培養(yǎng)及組培苗病毒檢測的方法，其特征在于，具體步驟為：
(1)材料采集與消毒
于6月份剪取田間生長旺盛的甘薯苗頂芽，切去葉片，自來水沖洗40-50min，用無菌濾紙吸干水分，置于超凈工作臺上用75％酒精浸洗25s，再用0.1％升汞消毒5min，最后用無菌水沖洗7-8次，備用；
(2)莖尖剝離與培養(yǎng)
在雙目解剖鏡下，將消毒后的甘薯頂芽用注射器針尖剝?nèi)ネ鈱尤~片，僅留1-2個葉原基，將5-6個大小為0.1-0.2mm的莖尖接種在初代培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，培養(yǎng)基中蔗糖為30g/L，瓊脂為6.0g/L，pH為5.8，培養(yǎng)溫度為25℃，光照強度2000-3000lx，光照時間12h/d，培養(yǎng)40天，得到組培苗；
(3)組培苗病毒檢測
采用指示植物針刺汁液沾接法進行病毒檢測：在巴西牽牛初生健康葉上，用滅菌注射器刺孔，然后將待測的甘薯葉片、葉柄及幼莖包扎在一起擠出汁液，沾接在針刺孔上，并以滅菌水及已知帶毒薯液同樣接種作為陰性對照和陽性對照，置于30℃防蟲網(wǎng)室內(nèi)遮蔭保濕培養(yǎng)；接種后20天連續(xù)觀察記載癥狀，根據(jù)指示植物癥狀，在所有沾接的指示植物中只要有一株表現(xiàn)典型癥狀，該樣品即為陽性；根據(jù)檢測結(jié)果淘汰帶毒苗，保留脫毒苗。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種甘薯莖尖離體培養(yǎng)及組培苗病毒檢測的方法，其特征在于，莖尖剝離與培養(yǎng)過程中初代培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.0mg/L+NAA0.1mg/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種甘薯莖尖離體培養(yǎng)及組培苗病毒檢測的方法，其特征在于，組培苗病毒檢測過程中沾接的指示植物表現(xiàn)的典型癥狀為新生葉出現(xiàn)系統(tǒng)性明脈、黃脈，以后發(fā)展為花葉或皺縮。
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