[發(fā)明專利]細(xì)胞分離制片染色一體裝置和循環(huán)腫瘤細(xì)胞捕獲方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710211262.6
• 申請日: 2017-04-01
• 公開（公告）號: CN106989970A
• 公開（公告）日: 2017-07-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馮澄宇
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州汶顥微流控技術(shù)股份有限公司
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/34;G01N1/31
• 代理公司: 蘇州謹(jǐn)和知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙)32295
• 代理人: 仲崇明

1.一種細(xì)胞分離制片染色一體裝置，其特征在于，包括基材以及沿第一方向延伸于基材內(nèi)的溝道，所述溝道位于第一方向的兩端分別形成有樣品入口和樣品出口，所述溝道內(nèi)并列設(shè)置有n排微柱陣列，n≥2，每排所述微柱陣列沿第二方向延伸，所述第二方向垂直于所述第一方向，每排所述微柱陣列分別包括間隔設(shè)置的多個微柱，相鄰所述微柱之間形成有捕捉間隙，并滿足：

(a)、自樣品入口至樣品出口方向，第x排微柱陣列的捕捉間隙＞第x+1排微柱陣列的捕捉間隙，1≤x＜n；

(b)、第n排微柱陣列的捕捉間隙小于循環(huán)腫瘤細(xì)胞的外徑。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞分離制片染色一體裝置，其特征在于：所述基材包括上下疊加設(shè)置的聚二甲基硅氧烷和標(biāo)準(zhǔn)載玻片，所述溝道形成于聚二甲基硅氧烷和標(biāo)準(zhǔn)載玻片之間。

3.基于權(quán)利要求1或2所述的細(xì)胞分離制片染色一體裝置的循環(huán)腫瘤細(xì)胞捕獲方法，其特征在于，包括步驟：

(1)、采用紅細(xì)胞裂解液裂解腫瘤病人血樣中的紅細(xì)胞，離心吸取上清液，用細(xì)胞緩沖液重懸剩余細(xì)胞；

(2)、將獲得的細(xì)胞懸液從樣品入口通入微流控芯片中，完成循環(huán)腫瘤細(xì)胞的捕獲。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的循環(huán)腫瘤細(xì)胞捕獲方法，其特征在于，步驟(1)中，所述的細(xì)胞裂解液為紅細(xì)胞裂解液。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的循環(huán)腫瘤細(xì)胞捕獲方法，其特征在于，步驟(1)中，細(xì)胞緩沖液為牛血清白蛋白和tewwn20的磷酸緩沖液。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的循環(huán)腫瘤細(xì)胞捕獲方法，其特征在于，步驟(2)中，細(xì)胞固定液為4％多聚甲醛水溶液。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的循環(huán)腫瘤細(xì)胞捕獲方法，其特征在于，還包括循環(huán)腫瘤細(xì)胞熒光染色步驟：

(3)、將細(xì)胞透膜液通入微流控芯片中，對細(xì)胞進(jìn)行透膜；將細(xì)胞清洗液通入微流控芯片，對透膜后的細(xì)胞進(jìn)行清洗；將免疫熒光染料通入微流控芯片中，避光孵育，對細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光染色；將細(xì)胞核染料通入微流控芯片中，靜置，對細(xì)胞核進(jìn)行染色；將細(xì)胞清洗液通入微流控芯片，對染色后的細(xì)胞進(jìn)行清洗。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的循環(huán)腫瘤細(xì)胞捕獲方法，其特征在于，所述細(xì)胞透膜液為表面活性劑TritonX100水溶液。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的循環(huán)腫瘤細(xì)胞捕獲方法，其特征在于，所述細(xì)胞清洗液為磷酸緩沖液。

10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的循環(huán)腫瘤細(xì)胞捕獲方法，其特征在于，所述的免疫熒光染料為抗細(xì)胞角蛋白熒光染料和白細(xì)胞共同抗原染料；所述的細(xì)胞核染料為Hoechst染料。