[發明專利]一種L-蘋果酸鈉的直接酶促轉化生產方法在審
| 申請號： | 201710208506.5 | 申請日： | 2017-03-31 |
| 公開（公告）號： | CN108660164A | 公開（公告）日： | 2018-10-16 |
| 發明（設計）人： | 周鐵成;王云山;王自強;馮曉東;趙晶 | 申請（專利權）人： | 懷來縣長城生物化學工程有限公司 |
| 主分類號： | C12P7/46 | 分類號： | C12P7/46 |
| 代理公司： | 北京信慧永光知識產權代理有限責任公司 11290 | 代理人： | 董世豪;張淑珍 |
| 地址： | 075400 河北省*** | 國省代碼： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 催化 延胡索酸水合酶 酶促轉化 蘋果酸鈉 底物 編碼基因片段 產品質量問題 碳酸鈣 反應平衡 工業應用 環境效益 回收利用 蘋果酸鈣 蘋果酸鹽 生產過程 無副產物 副產物 富馬酸 碳酸鈉 偏移 鈣鹽 正向 制備 生產 克隆 中和 殘留 合成 排放 轉化 | ||
1.一種通過酶促轉化直接生產L-蘋果酸鈉的方法，所述方法包括以下步驟：
(1)將富馬酸和選自碳酸氫鈣、氫氧化鈣和碳酸鈣中的一種或多種鈣鹽加入水中并攪拌混勻以進行中和反應，待所述中和反應完成后，任選調節反應體系的pH值為6.5-7.0，得到富馬酸鈣懸濁液；
(2)向步驟(1)得到的所述富馬酸鈣懸濁液中加入延胡索酸水合酶催化制劑進行酶促反應，生成L-蘋果酸鈣懸濁液，其中，所述延胡索酸水合酶催化制劑選自延胡索酸水合酶或者表達所述延胡索酸水合酶的重組工程菌，所述延胡索酸水合酶為FUMA、FUMC或它們的混合物；
(3)向步驟(2)得到的所述L-蘋果酸鈣懸濁液中加入碳酸鈉以進行中和反應，待所述中和反應完成后，得到L-蘋果酸鈉和碳酸鈣的混合物；
(4)將步驟(3)得到的所述混合物進行固液分離，得到L-蘋果酸鈉的上清液以及作為沉淀物的碳酸鈣，其中，將所述L-蘋果酸鈉的上清液進行處理制得固體的L-蘋果酸鈉，將所述碳酸鈣回收以在步驟(1)中作為鈣鹽循環使用。
2.如權利要求1所述的方法，在所述步驟(1)中，所述富馬酸與所述鈣鹽的摩爾比為1:1至1:0.5。
3.如權利要求1或2所述的方法，在所述步驟(1)中，所述水是溫度為52-58℃的預熱的水。
4.如權利要求1-3中任一項所述的方法，其中，采用氫氧化鈣和/或碳酸氫鈣調節反應體系的pH值。
5.如權利要求1-4中任一項所述的方法，在所述步驟(2)中，所述FUMA使用如SEQ IDNO：1示出的核酸序列編碼得到。
6.如權利要求1-5中任一項所述的方法，在所述步驟(2)中，所述FUMC使用如SEQ IDNO：2示出的核酸序列編碼得到。
7.如權利要求1-6中任一項所述的方法，在所述步驟(2)中，所述重組工程菌為導入有如SEQ ID NO：1和/或SEQ ID NO：2示出的核酸序列的重組工程菌。
8.如權利要求1-7中任一項所述的方法，在所述步驟(3)中，所述碳酸鈉與所述L-蘋果酸鈣懸濁液的摩爾比為1:1。
9.如權利要求1-8中任一項所述的方法，在所述步驟(4)中，將步驟(3)得到的所述混合物通過離心進行固液分離。
10.如權利要求1-9中任一項所述的方法，在所述步驟(4)中，對所述L-蘋果酸鈉的上清液進行的所述處理包括濃縮、結晶和干燥。
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