[發(fā)明專利]一種尿液中細胞染色后快速顯色的染色劑及其使用方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710207744.4
• 申請日: 2017-03-31
• 公開（公告）號: CN107167356B
• 公開（公告）日: 2020-02-04
• 發(fā)明（設計）人: 孟令敏;趙亞榮;何浩會
• 申請（專利權）人: 迪瑞醫(yī)療科技股份有限公司
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30
• 代理公司: 44268 深圳市君勝知識產權代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 王永文;朱陽波

1.一種尿液中細胞染色后快速顯色的染色劑，其特征在于，包括試劑A和試劑B，且試劑A和試劑B的質量比為0.25～4，在染色劑中，

試劑A包括:

中性紅染料0.6～1.2g；所述中性紅染料，作為一種弱堿性染料，其在近中性和堿性條件下帶正電，與細胞內含負電基團的染色質分子上的磷酸基團，蛋白質分子上的羧基及細胞膜上的唾液酸分子相互作用顯紅色；

染料溶劑100g；所述染料溶劑為純化水和有機溶劑中的一種或多種，所述有機溶劑可為甲醇、乙醇、乙二醇、戊醇、丙三醇、二甲基亞砜中的一種或其組合物；

試劑B包括:

緩沖劑10mM～600mM；所述緩沖劑為2-(N-嗎啡啉)乙磺酸、1，3-二[(三羥甲基)甲氨基]丙烷、哌嗪-1，4-二乙磺酸、3-(N-嗎啉基)丙磺酸、3-(N-嗎啉基)-2-羥基丙磺酸、磷酸氫二鈉-檸檬酸、磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉-磷酸二氫鉀、磷酸二氫鉀-氫氧化鈉、三羥甲基氨基甲烷-鹽酸、巴比妥鈉-鹽酸、丙酸-丙酸鈉、乙酸-乙酸鈉中的一組或幾組的混合物；

細胞膜損傷劑0.1～8g，所述細胞膜損傷劑為：CH₃(CH₂)_n1COOR，n₁＝1，2或3，其中R為Na、H或K；

絡合劑0～4g；所述絡合劑為檸檬酸、檸檬酸鹽或乙二胺四乙酸鹽；

pH調節(jié)劑0.01～10g；所述pH調節(jié)劑為乙酸、丙酸、鹽酸；

溶劑100g。

2.一種尿液中細胞染色后快速顯色的染色劑的使用方法，其特征在于，包括：

步驟S1、制備試劑A和試劑B，所述試劑A包括：

中性紅染料0.6～1.2g；所述中性紅染料，作為一種弱堿性染料，其在近中性和堿性條件下帶正電，與細胞內含負電基團的染色質分子上的磷酸基團，蛋白質分子上的羧基及細胞膜上的唾液酸分子相互作用顯紅色；

染料溶劑100g；所述染料溶劑為純化水和有機溶劑中的一種或多種，所述有機溶劑可為甲醇、乙醇、乙二醇、戊醇、丙三醇、二甲基亞砜中的一種或其組合物；

所述試劑B包括：

緩沖劑10mM～600mM；所述緩沖劑為2-(N-嗎啡啉)乙磺酸、1，3-二[(三羥甲基)甲氨基]丙烷、哌嗪-1，4-二乙磺酸、3-(N-嗎啉基)丙磺酸、3-(N-嗎啉基)-2-羥基丙磺酸、磷酸氫二鈉-檸檬酸、磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉-磷酸二氫鉀、磷酸二氫鉀-氫氧化鈉、三羥甲基氨基甲烷-鹽酸、巴比妥鈉-鹽酸、丙酸-丙酸鈉、乙酸-乙酸鈉中的一組或幾組的混合物；

細胞膜損傷劑0.1～8g，所述細胞膜損傷劑為：CH₃(CH₂)_n1COOR，n₁＝1，2或3，其中R為Na、H或K；

絡合劑0～4g；所述絡合劑為檸檬酸、檸檬酸鹽或乙二胺四乙酸鹽；

pH調節(jié)劑0.01～10g；所述pH調節(jié)劑為乙酸、丙酸、鹽酸；

溶劑100g；

步驟S2、先將制備的所述試劑A和試劑B按質量比為0.25～4的比例混合得到染色劑，再將所述染色劑滴加到濃縮或非濃縮后的尿液樣本上；

步驟S3、染色5～30s后，得到染色后的尿液樣本。

3.根據權利要求2所述的尿液中細胞染色后快速顯色的染色劑的使用方法，其特征在于，試劑A和試劑B的制備方法分別為：

試劑A的制備：

A1、將染料溶劑及化學染料按順序加入到試劑瓶中，得到第一混合溶液A1；

A2、將含有第一混合溶液A1的試劑瓶置于搖床上充分溶解2～5小時，得到第二混合溶液A2；

A、對所述第二混合溶液A2進行過濾，將濾液標記為試劑A，并保存?zhèn)溆茫?/p>

試劑B的制備：

B1、將緩沖劑、絡合劑和細胞膜損傷劑加入純化水中，使其充分溶解得到第一混合溶液B1；

B2、向所述第一混合溶液B1中加入pH調節(jié)劑調節(jié)pH值至4.8至7.0，得到第二混合溶液B2；

B、對所述第二混合溶液B2進行過濾，將濾液標記為試劑B，并保存?zhèn)溆谩?/p>

4.根據權利要求2所述的尿液中細胞染色后快速顯色的染色劑的使用方法，其特征在于，所述染色劑中試劑A和試劑B的質量比范圍為0.67～1.5。

5.根據權利要求2所述的尿液中細胞染色后快速顯色的染色劑的使用方法，其特征在于，所述尿液樣本與染色劑的體積比為1～8。