[發明專利]一種小黃魚和大黃魚幼魚的PCR鑒定方法及引物在審
| 申請號： | 201710204070.2 | 申請日： | 2017-03-30 |
| 公開（公告）號： | CN106884053A | 公開（公告）日： | 2017-06-23 |
| 發明（設計）人： | 劉洋;蔡珊珊;韓志強 | 申請（專利權）人： | 浙江海洋大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州杭誠專利事務所有限公司33109 | 代理人： | 尉偉敏,趙越劍 |
| 地址： | 316022 浙江省*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 小黃魚 大黃魚 幼魚 pcr 鑒定 方法 引物 | ||
1.一種小黃魚和大黃魚幼魚的PCR鑒定方法，其特征在于，所述PCR鑒定方法步驟為：提取樣品的基因組DNA，采用鑒定引物對提取的DNA進行PCR擴增，PCR擴增產物用瓊脂糖凝膠電泳檢測，出現一條擴增條帶的為小黃魚，出現兩條擴增條帶的為大黃魚；所述鑒定引物序列如下：
COI-F：5’-GTTACGGCACATGCYTTCGT-3’
COI-R1：5’-GGAAACACCTGCGAGGTGTA-3’
COI-R2：5’-TARAGGATGGGATCGCCTCC-3’。
2.根據權利要求1所述的PCR鑒定方法，其特征在于，所述PCR擴增體系為：所述PCR擴增體系為：10×buffer 2.5μl，dNTP 2μl，COI-F 1μl，COI-R1 1μl，COI-R2 1μl，Taq酶0.15μl，DNA模板1μl，ddH2O補足體系至25μl。
3.根據權利要求2所述的PCR鑒定方法，其特征在于，dNTP的終濃度為0.8mM，COI-F的終濃度為1μM，COI-R1的終濃度為1μM，COI-R2的終濃度為1μM，Taq酶終濃度為0.04U/μl。
4.根據權利要求1或2所述的PCR鑒定方法，其特征在于，所述PCR擴增條件為：94℃預變性3min，后經過40個循環，每個循環包括94℃45s，50℃45s，72℃45s；最后72℃延伸10min。
5.一種用于鑒定小黃魚和大黃魚幼魚的引物，其特征在于，包括三條特異性引物，引物序列如下：
COI-F：5’-GTTACGGCACATGCYTTCGT-3’
COI-R1：5’-GGAAACACCTGCGAGGTGTA-3’
COI-R2：5’-TARAGGATGGGATCGCCTCC-3’。
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